Western blotting ECL 化學(xué)發(fā)光法 檢測試劑盒

Western blotting ECL  化學(xué)發(fā)光法 檢測試劑盒 說明書

產(chǎn)品內(nèi)容：

1. 封閉試劑：30g(可配制 400ml)。

2. 10 倍濃縮抗體稀釋液，50ml。

3. HRP 標(biāo)記二抗，0.3ml，效價 1：500-1000。

4. ECL 顯色液，25mlA+25mlB。

保存：

-20℃避光密閉保存，一年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 ECL 顯色液存放于 2-8℃以方便

使用。

產(chǎn)品簡介：

SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以

非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第

二抗體起反應(yīng)，加入發(fā)光底物后，能讓膠片感光。經(jīng)顯影和定影后，可以在膠片上顯示出條帶（抗原所在位置） 。

操作步驟：(僅供參考)

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:

1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標(biāo)記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以盡量洗

去轉(zhuǎn)印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。

2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜放入封

閉液內(nèi)，置搖床孵育，室溫封閉 30min。用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 5min。

3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1×（10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水，混勻，可 4℃保存三個月） 。

此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入

一抗工作液，封口，4℃孵育過夜或 37℃搖動孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所

加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標(biāo)記，分開孵育。

5) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 5min。

6) 用 1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 15ul HRP 標(biāo)記二抗的比例，配制二抗工作

液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃搖動孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使

用一次。

7) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 10min。

8) 根據(jù)用量，取 ECL 發(fā)光液 A、B 等量混勻，加在膜正面，暗室顯色 1-5 分種。傾去顯色液，小心用紙吸去顯色

液，在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片，做好標(biāo)記，輕輕的放在膜上，顯色 30 秒到 1 分鐘，取出膠片

浸入顯影液中，觀察顯*況，再放入定影液中 1 分鐘。根據(jù)條帶強弱，再次感光時可減短或者加長感光時間（從

5 秒到 30 分鐘）以期達到理想結(jié)果。
相關(guān)試劑盒

SW2010 Western blotting (小鼠 IgG) ECL 化學(xué)發(fā)光法顯色試劑盒

SW2020 Western blotting (兔 IgG) ECL 化學(xué)發(fā)光法顯色試劑盒

SW2030 Western blotting (山羊 IgG) ECL 化學(xué)發(fā)光法顯色試劑盒

SW2040 Western blotting(小鼠/兔 IgG) ECL 化學(xué)發(fā)光法顯色試劑盒

SW2050 Western blotting(人 IgG) ECL 化學(xué)發(fā)光法顯色試劑盒

注意事項：

1. 請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。

2. 可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實驗反應(yīng)時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長zui終漂洗次數(shù)與時間。如果條

帶過弱，可增加抗體濃度，可延長抗體孵育時間或加長感光時間。

3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6，

再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加至 1000ml，混勻即可。 （也可按照自己的配制習(xí)慣來配制）

相關(guān)產(chǎn)品：

D1060 10× 電泳轉(zhuǎn)移緩沖液

A1800 抗體稀釋液（普通型）

T1081 10*TBST

SW3010 膜封閉液

SW3020 膜再生液

PE0010 ECL Plus 熒光檢測試劑 (ECL 超敏發(fā)光液 )

XYF 顯影粉

DYF 定影粉

AH 暗盒

JPKD-5*7 膠片