小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)留心的事項(xiàng)
小鼠ELISA試劑盒用于測定血清、血漿、組織和相關(guān)液體樣本中的含量或許活性。試劑盒選用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠總補(bǔ)體(CH50)捕獲抗原的包被微孔中,依次參加標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP符號的檢測抗體,通過溫育并*洗刷。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終究的。顏色的深淺和樣品中的小鼠總補(bǔ)體(CH50)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),核算樣品濃度。為了確保實(shí)驗(yàn)的成功,有必要了解一下小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)須留心的事項(xiàng)。
一、實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間留心事項(xiàng)
1、在備孔稀釋好待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品;
2、上板:應(yīng)從終究一孔上完板初步計(jì)時(shí),以確保反應(yīng)時(shí)間;
3、加底物:應(yīng)從加*孔初步計(jì)時(shí),以確保加停止液時(shí)的反應(yīng)時(shí)間是5分鐘。
二、移液器的運(yùn)用留心事項(xiàng)
1、設(shè)定移液體積:從小量程調(diào)理至大量程時(shí),應(yīng)先調(diào)至逾越設(shè)定體積刻度,再回調(diào)至設(shè)定體積,這樣能夠確保移液器的度;
2、裝配槍頭:將移液槍垂直刺進(jìn)吸頭,左右旋轉(zhuǎn)半圈,上緊即可;
3、吸液和放液:吸頭浸入液面3mm以下,吸液前槍頭先在液體中預(yù)潤洗2-3次確保移液的精度和準(zhǔn)度,慢吸慢放,以防俄然松開溶液吸入過快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而構(gòu)成漏氣;
4、吸有液體的移液槍不應(yīng)平放;
5、移液槍在每次實(shí)驗(yàn)后應(yīng)將刻度調(diào)至zui大量程,讓彈簧回復(fù)原型以延伸移液槍的運(yùn)用壽命。
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