細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的首要辦法之一。使用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,能夠使細(xì)胞暫時(shí)脫離成長狀況而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需求的時(shí)分再復(fù)蘇細(xì)胞用于試驗(yàn)。并且適度地保存一定量的細(xì)胞,能夠避免因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的效果。除此之外,還能夠使用細(xì)胞凍存的方式來購買、寄贈(zèng)、交流和運(yùn)送某些細(xì)胞。
細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點(diǎn)下降,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶構(gòu)成,然后避免細(xì)胞損傷。 選用"慢凍快融"的辦法能較好地保證細(xì)胞存活。規(guī)范冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加快,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
細(xì)胞冷凍辦法:
1.4℃以下慢慢地冷凍,保存于液態(tài)氮中(-196℃)。
2.有些細(xì)胞假如選用上述的辦法時(shí),無法得到高的存活率。此刻,則必需考慮可能損傷細(xì)胞的機(jī)制,添加劑之效果等而來找出適當(dāng)?shù)臈l件來批改。
補(bǔ)白:經(jīng)過冷凍保存后的細(xì)胞,其生存率會(huì)下降,冷凍時(shí)之冷卻速度,保存溫度,凍結(jié)時(shí)升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之品種、濃度等都可影響細(xì)胞存活率。
3.37℃快速凍結(jié)。
4.保護(hù)劑(抗凍劑):添加甘油 (glycerol) ( I0 %左右 ) 或dimethy1sulfoxide (DMSO) ( 5- 10% ) 。
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