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植物組織鈣離子含量測(cè)定的試劑盒
(貨號(hào)：MB-0028-2 微板法)
一、測(cè)定原理：
樣本中鈣離子在堿性溶液中與甲基百里香酚藍(lán)（MTB）結(jié)合，生成藍(lán)色絡(luò)合物；通過比色與同樣處理的鈣標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，可計(jì)算出樣本中鈣的含量。
二、試劑盒組成：(96T)
96T | 規(guī) 格 | 組 份 | 保 存 |
試劑一 | 10ml×1瓶 | MTB試劑 | 4℃避光保存6個(gè)月 |
試劑二 | 20ml×1瓶 | 堿性溶液 | 室溫保存6個(gè)月 |
試劑三 | 1ml×1瓶 | 蛋白澄清劑 | 室溫保存6個(gè)月 |
試劑四 | 1ml×1支 | 2.5mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液 | 4℃避光保存6個(gè)月 |
1mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用去離子水將2.5mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行2.5倍稀釋(即2:3稀釋) | |||
工作液Ⅰ的配制:試劑一:試劑二 = 1 : 2 的比例進(jìn)行配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。（測(cè)血清（漿）樣本） | |||
工作液Ⅱ的配制: 試劑一:試劑二:試劑三 = 10 : 20 :1 的比例進(jìn)行配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。（測(cè)組織樣本） | |||
三、樣本要求：
1、按常規(guī)檢驗(yàn)要求采集處理樣本, 樣本可以是血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞、培養(yǎng)上清。
2、樣本2～8℃可穩(wěn)定3～4天,-20℃以下可穩(wěn)定數(shù)月。
四、測(cè)定步驟：
（一）、血清（漿）操作步驟:
1、操作表：
| 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
去離子水（µl） | 10 |
|
|
1mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液（µl） |
| 10 |
|
血清（漿）（µl） |
|
| 10 |
工作液Ⅰ（µl） | 250 | 250 | 250 |
混勻，靜置5分鐘后，波長(zhǎng)610nm，酶標(biāo)儀比色，測(cè)各孔OD值。
注:實(shí)驗(yàn)前可先將96孔板用酶標(biāo)儀讀取并記錄空板OD值,以保證實(shí)驗(yàn)的度。
2、計(jì)算公式：
（二）、組織或細(xì)胞勻漿的操作：
1、前處理:
準(zhǔn)確稱取組織重量按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的去離子水，冰水浴勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取10%的勻漿上清液待測(cè)。
2、操作表：
| 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
去離子水（µl） | 10 |
|
|
1mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液（µl） |
| 10 |
|
組織勻漿上清液（µl） |
|
| 10 |
工作液Ⅱ（µl） | 250 | 250 | 250 |
混勻，靜置5分鐘后，波長(zhǎng)610nm，酶標(biāo)儀比色，測(cè)各孔OD值。
注: 實(shí)驗(yàn)前可先將96孔板用酶標(biāo)儀讀取并記錄空板OD值,以保證實(shí)驗(yàn)的度。
3、計(jì)算公式： 
注：*gprot/L為克蛋白/升
五、技術(shù)參數(shù)：
波長(zhǎng)選擇范圍 | 600nm～630nm | 線性范圍 | 0～2mmol/L |
批間差 | ≤6% | 批內(nèi)差 | ≤4% |
保存條件 | 試劑盒4℃避光保存6個(gè)月 | ||
六、注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)應(yīng)避免鈣污染,建議*用一次性96孔板操作(本所有售)。
2、嚴(yán)重溶血、黃疸或脂血對(duì)結(jié)果有影響。
3、制備組織勻漿時(shí)，應(yīng)選用去離子水作為勻漿介質(zhì),避免鈣污染。
4、本試劑盒可上全自動(dòng)/半自動(dòng)生化分析儀
5、測(cè)定組織或細(xì)胞中鈣離子含量，推薦同時(shí)測(cè)定總蛋白濃度（本所有售總蛋白定量試劑盒A045-1總蛋白試劑盒（雙縮脲）、A045-2總蛋白試劑盒（考馬斯亮藍(lán)）、A045-3總蛋白試劑盒（BCA法））
6、本試劑盒僅用于科研。
附錄Ⅰ：鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
1、前處理：
用去離子水將2.5mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液稀釋成不同的濃度：0.0625mmol/L、0.125 mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、0.625mmol/L、1mmol/L、2mmol/L。
2、操作表：
| 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 |
去離子水（µl） | 10 |
|
不同濃度的鈣標(biāo)準(zhǔn)液（µl） |
| 10 |
工作液Ⅰ（µl） | 250 | 250 |
混勻，靜置5分鐘后，波長(zhǎng)610nm，酶標(biāo)儀比色，測(cè)各孔OD值。
注: 實(shí)驗(yàn)前可先將96孔板用酶標(biāo)儀讀取并記錄空板OD值,以保證實(shí)驗(yàn)的度。
3、測(cè)定結(jié)果：
標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mmol/L） | 測(cè)定OD值 | OD值 |
0 | 0.2428 | 0 |
0.0625 | 0.249 | 0.0062 |
0.125 | 0.259 | 0.0162 |
0.25 | 0.2809 | 0.0381 |
0.5 | 0.3195 | 0.0767 |
0.625 | 0.3376 | 0.0948 |
1 | 0.3918 | 0.1490 |
2 | 0.5352 | 0.2924 |
4、繪圖如下:
附錄Ⅱ：血清（漿）樣本鈣測(cè)定
1、操作表：
| 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
去離子水（µl） | 10 |
|
|
1mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液（µl） |
| 10 |
|
血清（漿）（µl） |
|
| 10 |
工作液Ⅰ（µl） | 250 | 250 | 250 |
混勻，靜置5分鐘后，波長(zhǎng)610nm，酶標(biāo)儀比色，測(cè)各孔OD值。
注: 實(shí)驗(yàn)前可先將96孔板用酶標(biāo)儀讀取并記錄空板OD值,以保證實(shí)驗(yàn)的度
2、計(jì)算公式： 
3、計(jì)算舉例：
例1：大鼠血清（漿）樣本用去離子水2.5倍稀釋后取樣10µl ，按說明書操作測(cè)得：空白孔OD值：0.2428，標(biāo)準(zhǔn)孔OD值：0.3918，測(cè)定孔OD值：0.3699，則計(jì)算結(jié)果為：
例2：犬血清（漿）樣本用去離子水2.5倍稀釋后取樣10µl ，按說明書操作測(cè)得：空白孔OD值：0.2428，標(biāo)準(zhǔn)孔OD值：0.3918，測(cè)定孔OD值：0.3902，則計(jì)算結(jié)果為：
例3：細(xì)胞上清樣本用去離子水2.5倍稀釋后取樣10µl ，按說明書操作測(cè)得：空白孔OD值：0.2428，標(biāo)準(zhǔn)孔OD值：0.3918，測(cè)定孔OD值：0.3639，則計(jì)算結(jié)果為：
附錄Ⅲ：組織樣本鈣測(cè)定
1、前處理:
準(zhǔn)確稱取組織重量按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的去離子水，冰水浴勻漿，2500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取10%的勻漿上清液待測(cè)。
2、操作步驟：
| 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測(cè)定孔 |
去離子水（µl） | 10 |
|
|
1mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液（µl） |
| 10 |
|
組織勻漿上清液（µl） |
|
| 10 |
工作液Ⅱ（µl） | 250 | 250 | 250 |
混勻，靜置5分鐘后，波長(zhǎng)610nm，酶標(biāo)儀比色，測(cè)各孔OD值。
注: 實(shí)驗(yàn)前可先將96孔板用酶標(biāo)儀讀取并記錄空板OD值,以保證實(shí)驗(yàn)的度。
3、計(jì)算公式：
注：*gprot/L為克蛋白/升
4、計(jì)算舉例：
取10%的大鼠腦組織上清液10µl ，按說明書操作測(cè)得：空白孔OD值：0.2428，標(biāo)準(zhǔn)孔OD值：0.3918，測(cè)定孔OD值：0.2689，并測(cè)得10%大鼠腦組織蛋白濃度為3.8475gprot/L,則計(jì)算結(jié)果為：
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