小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)需要注意哪些問題
1．樣品稀釋
一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性.
2．試劑盒平衡
Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.
3．樣品和試劑的混勻
在稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性.
4．加樣
加樣是一項(xiàng)很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.
5．溫育
溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素.ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間.
6．洗板
固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA測(cè)定的特異性.洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙,尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果.
7．顯色
顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時(shí)間過短,結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.
8．比色
比色要注意波長的選擇.以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換.因此,容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問題.
小鼠ELISA試劑盒游離雌三醇(FE3)ELISA試劑盒 ，英文名： FE3 ELISA Kit

游離β絨毛膜促性腺激素(f-βhCG)ELISA試劑盒 ，英文名： f-βhCG ELISA Kit

幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 ，英文名： Hp-IgG ELISA Kit

幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒 ，英文名： Hp-IgM ELISA Kit

幽門螺桿菌細(xì)胞毒素相關(guān)基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA試劑盒 ，英文名： HP-CagA-IgG ELISA Kit

優(yōu)球蛋白(EL)ELISA試劑盒 ，英文名： EL ELISA Kit

硬骨素(SOST)ELISA試劑盒 ，英文名： SOST ELISA Kit

印度刺猬因子(IHH)ELISA試劑盒 ，英文名： IHH ELISA Kit

隱熱蛋白(NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1)ELISA試劑盒 ，英文名： NLRP3/C1orf7/CIAS1/NALP3/PYPAF1 ELISA Kit

吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)ELISA試劑盒 ，英文名： IDO ELISA Kit

音猬因子N端(Shh-N)ELISA試劑盒 ，英文名： Shh-N ELISA Kit

音猬因子(SHH)ELISA試劑盒 ，英文名： SHH ELISA Kit

抑制素β-B(Inhbb)ELISA試劑盒 ，英文名： Inhbb ELISA Kit

抑制素β-A(INHBA)ELISA試劑盒 ，英文名： INHBA ELISA Kit

抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒 ，英文名： INH-B ELISA Kit

抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒 ，英文名： INH-A ELISA Kit

抑制素(INH)ELISA試劑盒 ，英文名： INH ELISA Kit

抑肽酶(AP)ELISA試劑盒 ，英文名： AP ELISA Kit

抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒 ，英文名： OSM ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白R(shí)(hnRNP R)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP R ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP P2 ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M(hnRNP M)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP M ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L(hnRNP L)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP L ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K(hnRNP K)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP K ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I/PTB)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP I/PTB ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白H(hnRNP H)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP H ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hnRNP G)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP G ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E(hnRNP E)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP E ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D(hnRNP D)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP D ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白C(hnRNP C)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP C ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP A3 ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP A2/B1 ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP A1 ELISA Kit

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP A0 ELISA Kit

異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體(hnRNP/RA33)ELISA試劑盒 ，英文名： hnRNP/RA33 ELISA Kit小鼠ELISA試劑盒