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液相色譜是以經(jīng)典的液相色譜為基礎,它是以高壓下的液體為流動相的色譜過程。它所用的固定向粒度小(5-10um),有傳質(zhì)快、柱效高等特點。液相色譜法(HPLC)是60年代后期發(fā)展起來的一種分析方法。
輸液泵/高壓泵是保證HPLC系統(tǒng)流路暢通、流量和壓力穩(wěn)定的重要儀器部件。目前多用往復式恒流柱塞泵。主要由柱塞桿、密封墊圈和兩個單項閥組成,用馬達帶動凸輪驅(qū)動柱塞桿作吸液和排液的往復運動。常見泵的故障主要有以下幾種,并提供解決的辦法。
1、單向閥故障
由于球與閥座密封不嚴,導致液體倒流,造成壓力不穩(wěn),甚至球與閥座粘在一起阻死。為避免單項閥中的寶石球和閥座被污染,流動相應使用HPLC級的溶劑,并且配好的流動相一定要用0.45um濾膜過濾和脫氣。如果泵被微粒污染,可分別用25ml水 25ml甲醇 25ml異丙醇 25ml二氯甲烷依次沖洗,zui后再用所用的溶液沖洗整個系統(tǒng)。注意:沖洗時應打開泄液閥。如果氣泡進入閥中,它會緊貼在閥體的一側(cè),使寶石球難返回到閥座,引起液體倒流,導致泵的壓力和流速明顯改變。此時應立即打開瀉液閥,大流量(2ml/min)沖洗泵,直至排除液為直線型。如果泵進氣泡也可在泵頭上排氣泡,具體做法為:用扳手固定住進氣泡的泵頭,擰開輸出管道的壓帽,手動泵進液,這時可見到氣泡從孔中擠壓出來,直至無氣泡排出將壓帽擰緊。如果采取上述方法仍不能使壓力穩(wěn)定,應考慮是密封墊圈壞了?或單向閥磨損、球不光滑等,需更換部件。
2、泵墊圈故障
泵墊圈常見的故障是滲漏和墊圈受損污染系統(tǒng).液相色譜系統(tǒng)一般情況下不要使用強酸強堿溶液,樣品PH值一般調(diào)到中性,才可進樣。如果強酸強堿會損壞密封墊和柱塞桿。密封圈與運動著的柱塞桿緊密接觸,可使柱塞在泵頭自由運動而流動相不漏出來,它是液相色譜中zui易磨損的部件。有條件的實驗室可三個月更換一次墊圈,以防止泵系統(tǒng)污染。如果用緩沖鹽作流動相則更會加速墊圈的磨損,應及時沖洗。墊圈損壞一般表現(xiàn)為:泵壓力不穩(wěn)、泵頭漏液。為避免上述故障的發(fā)生,我們在分析中應注意以下幾點:
?、偈褂贸兯⒓兌燃墑e較高的試劑和色譜級溶劑配制流動相;
?、谂浜玫牧鲃酉嘁欢ㄒ闉V脫氣,即便儀器有在線脫氣裝置,也在上機前進行抽濾;
?、郾迷趩忧耙欢ㄒㄟ^泄液閥抽凈泵里的空氣;
?、苡镁彌_鹽洗脫時,分析結(jié)束后一定要用水沖洗泵和整個流路系統(tǒng),zui后用有機溶劑充滿系統(tǒng)。
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