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腫瘤細胞如何進行傳代?

來源:上海研生實業(yè)有限公司   2018年05月17日 14:37  

腫瘤細胞是科研實驗中常用到的細胞,當人臍靜脈內皮細胞達到90%融合時,需要對細胞進行傳代培養(yǎng)。

首先培養(yǎng)瓶的準備:用纖維粘連蛋白(BPF,貨號#8248)包被培養(yǎng)瓶,包被濃度為2ug/cm2,包被時間為4度過夜或37度一小時。

將培養(yǎng)基(ECM,貨號#1001)、胰酶/EDTA消化液(T/S,貨號#0103)、胰酶中和液(TNS,貨號#0113)和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液(DPBS,貨號#0303),溫度回復至室溫,我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。

棄去原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用10mlDPBS沖洗人臍靜脈內皮細胞,然后加入2ml胰酶消化液。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以至胰酶消化液覆蓋所有人臍靜脈內皮細胞。注意:使用ScienCell實驗室的胰酶/EDTA消化液,會把胰酶消化對臍靜脈內皮細胞的損害減少到zui低。

將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘,在孵化后期,輕輕拍打培養(yǎng)瓶以使臍靜脈內皮細胞脫離瓶壁。顯微鏡下觀察臍靜脈內皮細胞形態(tài)變化,直至80%臍靜脈內皮細胞變圓。然后立即加入10ml胰酶中和液并輕輕搖動培養(yǎng)瓶。

收集人臍靜脈內皮細胞并將其轉入50ml離心管中。再加入10ml培養(yǎng)基沖洗培養(yǎng)瓶以確保收集所有的殘余臍靜脈內皮細胞。在顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中剩余臍靜脈內皮細胞的數(shù)量以確定是否將臍靜脈內皮細胞大部分收集,剩余臍靜脈內皮細胞數(shù)應小于5%。

以1000轉/分(1000rpm)離心收取的臍靜脈內皮細胞5分鐘,棄去上清,在新加的培養(yǎng)基中重懸臍靜脈內皮細胞。

腫瘤細胞計數(shù),然后將它們接種到新的纖維粘連蛋白包被過的培養(yǎng)瓶中,37度培養(yǎng)即可。

 CBP/CREBBP 血小板源性生長因子受體-B抗體

 Cbx8 血小板源性生長因子受體-A抗體

 CC16 血小板源性生長因子-B抗體

 CCK8 血小板源性生長因子-BB抗體

 CCL1/TCA3/I-309 血小板源性生長因子-A抗體

 CCL11/Eotaxin 1 血小板因子4抗體

 CCL12/MCP5 血小板糖蛋白GPIb抗體

 CCL13/MCP-4 血小板內皮細胞黏附分子-1抗體

 CCL14/HCC-1 血小板內皮細胞黏附分子-1抗體

 CCL15/MIP5 血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體
腫瘤細胞

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