細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室如何構(gòu)建無(wú)菌操作環(huán)境

一、細(xì)胞培養(yǎng)及其實(shí)驗(yàn)室說(shuō)明

 組織培養(yǎng)是在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無(wú)菌、適當(dāng)溫度和一定營(yíng)養(yǎng)條件下，使從體內(nèi)取出的組織生存、生長(zhǎng)繁殖和傳代，并維持原有的結(jié)構(gòu)和功能特性。

 所謂細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞包括單個(gè)細(xì)胞在體外條件的生長(zhǎng)。

 組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無(wú)菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。目前，超凈工作臺(tái)的廣泛使用，很大程度上方便了組織細(xì)胞培養(yǎng)工作，并使一些常規(guī)實(shí)驗(yàn)室有可能用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作：無(wú)菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。

二、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作環(huán)境的構(gòu)建

1、無(wú)菌操作室

無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域，zui能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。

理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分：

a) 更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

b) 緩沖間—―位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境，同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。

c) 無(wú)菌操作間—―于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。其大小要適當(dāng)，且其頂部不宜過(guò)高(不超過(guò)2.5m)以保證紫外線(xiàn)的有效滅菌效果;墻壁光滑*以便清潔和消毒。

工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁，臺(tái)面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀(guān)察。

無(wú)菌操作間的空氣消毒：紫外線(xiàn)燈—-產(chǎn)生臭氧，并且室內(nèi)溫度及濕度均較高，不利于工作人員健康。

空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置—-。

潔凈室(區(qū))空氣潔凈度級(jí)別表潔凈度級(jí)別：

塵粒zui大允許數(shù)/立方米 100級(jí) 3,500 0 5 110000級(jí)

微生物zui大允許數(shù) 350,000 2,000 100 3100000級(jí)

浮游菌/立方米 3,500,000 20,000 50010300000級(jí)

沉降菌/皿 10,350,000 60,000 - 15

無(wú)臭氧紫外線(xiàn)消毒器電子消毒滅菌器—-在高壓電場(chǎng)作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧是一種強(qiáng)氧化劑，能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng)，從而靠臭氧氣體彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的，消毒時(shí)沒(méi)有死角。消毒后空間的殘留臭氧只需30～40min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。

2、凈化工作臺(tái)

操作簡(jiǎn)單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。

一般細(xì)菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺(tái)主要有兩種：

a)側(cè)流式或稱(chēng)垂直式

b)外流式或稱(chēng)水平層流式。

凈化工作臺(tái)工作原理大致相同，通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾，由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱，再經(jīng)空氣過(guò)濾器精濾，由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區(qū)，從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。

側(cè)流式工作臺(tái)：空氣凈化后的氣流由左或右側(cè)通過(guò)工作臺(tái)面流向?qū)?cè)，也有從上向下或從下向上流向?qū)?cè)，形成氣流屏障保持工作區(qū)無(wú)菌。工作臺(tái)結(jié)構(gòu)為封閉式。

外流式(水平式)工作臺(tái)：凈化后的空氣面向操作者流動(dòng)，因而外方氣流不致混入操作，但進(jìn)行有害物質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作則對(duì)操作者不利。