溫育是ELISA測定為要害、簡單出現(xiàn)問題的步驟。為常見的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。目前國內(nèi)售ELISA 試劑盒溫育時(shí)刻為37℃，30 min~1 h，進(jìn)口ELISA試劑盒則一般為37℃，1～2 h 能有較*的結(jié)合。  
溫育時(shí)刻、溫度的挑選一般依據(jù)試劑盒的說明書挑選溫育的時(shí)刻、溫度。加完樣本和（或）試劑后將微孔板從室溫放入水浴箱或溫箱中時(shí)，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃ 需求一定時(shí)刻，如果是將微孔板一放入溫箱即開端計(jì)時(shí)，這樣就簡單形成實(shí)際測定中溫育時(shí)刻不行，易致弱陽性標(biāo)本測不出來。
操控辦法：
①如有兩種溫度，盡量使 用較低的溫育溫度、較長反響時(shí)刻的條件；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反響液中丈量觀察。外周孔顯色較中心孔深的現(xiàn)象。發(fā)生的原因可能是為96 孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度形成的，因此在溫育時(shí)盡量采用水浴。

孵育前加樣時(shí)刻過長，酶試劑加出孔外，運(yùn)用滴瓶滴加試劑時(shí)，滴加的視點(diǎn)不同和揉捏的力度 不同，致使滴加的試劑量禁絕，都可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果禁絕確。
操控辦法：
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí)，可分批次操作，以削減實(shí)驗(yàn)時(shí)刻延伸形成的差錯(cuò)；
②加酶試劑后，用吸水 紙吸干孔外試劑；
③作定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，運(yùn)用加樣器加注試劑，并常常校對其性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，避免穿插污染。