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梯度洗脫使用的一些注意事項(xiàng)

來源:深圳通瑞色譜儀器有限公司   2018年06月19日 13:36  
在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品廣泛采用梯度洗脫的方法。梯度洗脫是指在同一個(gè)分析周期中隨著時(shí)間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強(qiáng)度、溶液極性等)或pH,以期將層析柱上不同的組分洗脫出來的方法。 
 
在液相色譜中梯度洗脫裝置分兩種:
 
1.高壓梯度:用兩臺(tái)高壓輸液泵將兩種溶劑輸入
2.低壓梯度:在常壓下將兩種溶劑(或多元溶劑)混合,然后用高壓輸液泵將流動(dòng)相輸入到色譜柱中。
梯度洗脫可提高分離度、縮短分離時(shí)間、降低小檢測(cè)量和提高分離精度。
 
梯度洗脫使用時(shí)應(yīng)注意:
 
1、注意各溶劑間的互溶性。
2、對(duì)溶劑的純度要求更高(影響重現(xiàn)性)。
3、注意梯度變化時(shí)系統(tǒng)壓力的變化,防止超出限度。
4、梯度結(jié)束后,用初始流動(dòng)相沖洗,使柱子平衡一段時(shí)間(再生),使系統(tǒng)回復(fù)到初始狀態(tài)。(梯度周期)
5、低壓梯度要注意脫氣,混合后容易產(chǎn)生氣泡。
6、容易出現(xiàn)鬼峰,應(yīng)作空白試驗(yàn)。
7、梯度選擇時(shí)盡量幾相之間相變化要小,否則不易平衡。
8、梯度洗脫應(yīng)使用對(duì)流動(dòng)相組成變化不敏感的選擇性檢測(cè)器(如紫外吸收檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器),而不能使用對(duì)流動(dòng)相組成變化敏感的通用型檢測(cè)器(如示差折光檢測(cè)器)。
9、要注意水相中鹽的濃度,防止在有機(jī)相提升過程中鹽的析出。

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