進(jìn)口elisa試劑盒驗(yàn)過(guò)程中常見(jiàn)
1．樣品稀釋
酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋?zhuān)豢杀苊鈺?huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶(hù)未能?chē)?yán)格按使用說(shuō)明書(shū)操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑐€(gè)別用戶(hù)取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)捎谖焐喜豢杀苊獾卣从袠悠芬约拔⒘恳埔浩鞯木炔粔颍虼嗽斐蓸悠废♂尡稊?shù)不準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問(wèn)題。
2．試劑盒平衡
試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。
3．樣品和試劑的混勻
稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。
4．加樣
加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。
5．溫育
溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗*為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。*為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說(shuō)明書(shū)操作，使用自己喜歡的溫育時(shí)間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因?yàn)?，不同試劑盒有不同的溫育時(shí)間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時(shí)間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。
6．洗板
固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過(guò)程中吸附的非特異成份分離開(kāi)來(lái)，以保證ELISA測(cè)定的特異性。洗板對(duì)于ELISA測(cè)定來(lái)說(shuō)，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。
7．邊緣效應(yīng)
使用96孔板的ELISA測(cè)定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測(cè)定的重復(fù)性。
8．顯色
顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可。一般來(lái)說(shuō)，顯色時(shí)間過(guò)短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，空白增高或者非特異性顯色增加。
9．比色
比色要注意波長(zhǎng)的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題。
進(jìn)口elisa試劑盒小鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒 ，英文名： PAF ELISA Kit

小鼠血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 ，英文名： TSP-1 ELISA Kit

小鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 ，英文名： FDP ELISA Kit

小鼠血纖蛋白原γ鏈(FGG)ELISA試劑盒 ，英文名： FGG ELISA Kit

小鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒 ，英文名： Fbg ELISA Kit

小鼠血纖蛋白(fibrin)ELISA試劑盒 ，英文名： fibrin ELISA Kit

小鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒 ，英文名： TXB2 ELISA Kit

小鼠血栓素A2(TXA2)ELISA試劑盒 ，英文名： TXA2 ELISA Kit

小鼠血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒 ，英文名： TpP ELISA Kit

小鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 ，英文名： CH50 ELISA Kit

小鼠血清素/血清胺(ST)ELISA試劑盒 ，英文名： ST ELISA Kit

小鼠血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)ELISA試劑盒 ，英文名： SAA3 ELISA Kit

小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒 ，英文名： SAA ELISA Kit

小鼠血漿激肽釋放酶(KLKB1)ELISA試劑盒 ，英文名： KLKB1 ELISA Kit

小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒 ，英文名： GMP-140 ELISA Kit

小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒 ，英文名： HO-2 ELISA Kit

小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒 ，英文名： HO-1 ELISA Kit

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)ELISA試劑盒 ，英文名： vWF ELISA Kit

小鼠血管舒緩激肽(BK)ELISA試劑盒 ，英文名： BK ELISA Kit

小鼠血管生長(zhǎng)素(ANG)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG ELISA Kit

小鼠血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)ELISA試劑盒 ，英文名： ANGPTL4 ELISA Kit

小鼠血管生成素Ⅱ(ANGⅡ)ELISA試劑盒 ，英文名： ANGⅡ ELISA Kit

小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG-4 ELISA Kit

小鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG-2 ELISA Kit

小鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒 ，英文名： ANG-1 ELISA Kit

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒 ，英文名： VCAM-1/CD106 ELISA Kit

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒 ，英文名： VEGFR-3/Flt-4 ELISA Kit

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒 ，英文名： VEGFR-3/Flt-4 ELISA Kit

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試劑盒 ，英文名： VEGFR-2/Flk-1 ELISA Kit進(jìn)口elisa試劑盒