国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網>技術中心>操作使用>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

甲基化特異性PCR

來源:上海希言科學儀器有限公司   2018年07月19日 11:16  

甲基化特異性PCR

標簽: 甲基化 特異性 PCR

DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉變?yōu)?-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯yi存在的化學性修飾堿基。

  • 亞硫酸氫鈉法
實驗方法原理MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因 組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,然后用3對特異性的引物對所測基因的同一核苷酸序列進行擴增。擴增產物用DNA瓊脂糖凝膠電泳,凝膠掃描觀察分析結果。
實驗材料

DNA

試劑、試劑盒

亞硫酸氫鈉、氫醌、石蠟油、乙醇

儀器、耗材

水浴鍋、PCR儀

實驗步驟

1.  在50 μl 體系中,DNA(2~5 μg)經NaOH(終濃度值0.2 mol/L)在37℃變性10 Min。

2.  對于ng級別的人基因組DNA,在進行修飾前加入2μg蛙魚精DNA為載體。


3.  加入30 μl 剛配制好的10 mmo/L 氫醌與520/1的40.5%亞硫酸氫鈉混勻。

4.  然后用石蠟油隔絕空氣的條件下,避光在50%溫育16 h。


5.  修飾后的DNA過WizerdDNA純化柱,用50/1 L 水洗脫。

6.  室溫下用NaOH(終濃度為0.3 mol/L)修飾5 min,之后用乙醇沉淀。


7.  DNA溶于20 μl 水中,立即使用或在-20℃保存。

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
铁力市| 同江市| 浏阳市| 昌黎县| 开江县| 朔州市| 南康市| 永兴县| 芦山县| 茶陵县| 会昌县| 芮城县| 泸州市| 兰溪市| 乌兰察布市| 灌南县| 青海省| 邻水| 南阳市| 广南县| 静宁县| 出国| 清水河县| 南充市| 南京市| 鹰潭市| 怀宁县| 金乡县| 楚雄市| 马边| 金昌市| 三门县| 阿克苏市| 迁西县| 旬阳县| 滕州市| 碌曲县| 嘉荫县| 神农架林区| 郴州市| 罗城|