ELISA試劑盒應(yīng)嚴(yán)厲遵循規(guī)則操作，必能得出的成果。首先應(yīng)選取的試劑，杰出的儀器和正確的操作是確保ELISA檢測(cè)成果牢靠的必要條件。所以ELISA試劑盒的購買，試劑質(zhì)量的確保以及試驗(yàn)前試驗(yàn)儀器的查看都是很重要的。
 一、標(biāo)本的采集及保存
1、血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)防止反復(fù)凍融。
2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)防止反復(fù)凍融。
二、試劑的預(yù)備 
按試劑盒說明書的要求預(yù)備試驗(yàn)中需用的試劑. ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)丈量較正.從冰箱中取出的試 驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用.試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
三、加樣：別離設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、規(guī)范孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上規(guī)范品加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。
四、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
五、洗刷：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
六、顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動(dòng)混勻，37℃避光顯色15分鐘.
七、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。