化學發(fā)光酶標儀的單雙波長測量方法你了解嗎？
　　在用酶聯(lián)免疫法測定抗原或抗體時，不論是定量試驗還是定性試驗都要求使用化學發(fā)光酶標儀進行測定。一般的化學發(fā)光酶標儀在測定中均有單波長和雙波長的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有時會不太重視單波長和雙波長的選擇，對使用單、雙波長給測定結果帶來的較大差異也不很了解，今天咱們就來了解一下這兩個測量方法。
　　化學發(fā)光酶標儀與分光光度計、自動生化分析儀等的吸光度測定有所不同，一般分光光度計是水平光路，而化學發(fā)光酶標儀則是垂直光路，但測定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，測定的都是樣本的吸光度。垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小，不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
　　化學發(fā)光酶標儀在用單波長測定吸光度時，除受到測定干擾（樣本的濁度、干擾色等）和電路干擾（包括噪音、漂移、電壓等）等因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中，由于液體表面張力的作用，液體的表面不是一個平面，而是形成一個凹面，從側面看似凹透鏡，這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響，光線在通過液體時，除正常被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測。而化學發(fā)光酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源，如果每次能在同一部位檢測，吸光度的重復性將得到保證，但由于機械運動等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部位被檢測，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
　　在雙波長測定中，減少了測定干擾和電路干擾，因此測定結果比單波長測量明顯好轉。
　　由于液體表面張力的不同，導致單波長測定時的誤差較大。并且用不同的洗滌劑會影響到后加入底物和終止液后的液面情況，用加入表面活性劑的洗滌液清洗后，形成的液面更凹，對單波長檢測的影響更大，并且與表面活性劑的濃度成正比。而且中性蒸餾水洗滌后，單、雙波長檢測的結果基本一致。
　　利用雙波長檢測，不會影響檢測靈敏度。建意在進行酶聯(lián)免疫檢測時，化學發(fā)光酶標儀比色應該優(yōu)選雙波長。這樣可以提高臨界值處標本的分析正確度，減少實驗誤差。