如何學會分離培養(yǎng)人的成纖維細胞？

來源：上海雅吉生物科技有限公司 2018年09月20日 08:55

成纖維細胞（又稱皮膚成纖維細胞）屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細胞。細胞來源于人正常的皮膚組織，成纖維細胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細胞，由于這些細胞非常容易培養(yǎng)，它們已經(jīng)被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。
一般而言，成纖維細胞能夠分泌I型和 III 型膠原等細胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。
傷口修復(fù)時，成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時，它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時的炎癥反應(yīng)。

以下是賽百慷提供的一種人成纖維細胞的制備方式（僅供參考）：

首先在分離成纖維細胞時要做到在無菌條件下進行，打開生物安全柜紫外燈 30min 作無菌處理。
將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡 75% 酒精，消毒 2min，
將皮膚組織置含 P/S 的 PBS 中清洗至少 3 遍，
然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等，
將皮膚剪成 0.5*0.5 cm 小塊，放入 dish 中，加 0.1% 的 dispase 溶液，封口膜封口，4℃ 冰箱過夜消化，
第二天，用鑷子將表皮與分開（薄的那層是表皮，厚的那層是），
將剪碎，移至離心管，用 0.1% 膠原 Ⅰ 型酶+0.1% 膠原Ⅱ型酶+0.1% 膠原Ⅳ型酶+ 37℃ 水浴鍋中消化至少 2 h（視消化程度而定），
用 100 μm 網(wǎng)篩過濾，
取濾液，300 g，離心5 min，
用*培養(yǎng)基重懸沉淀，
鋪瓶，
隔天換液。

以上是皮膚成纖維細胞分離培養(yǎng)的一種方式，不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同，皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測，采用細胞免疫熒光技術(shù)。細胞純度可高達于 90%，所有的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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