液相色譜法常用的檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器,包括二極管陣列檢測(cè)器,其他常見(jiàn)的檢測(cè)器有熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器等。
紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器為選擇性檢測(cè)器,其響應(yīng)值不僅與供試品溶液的濃度有關(guān),還與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān);蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器為通用型檢測(cè)器,對(duì)所有的化合物均有響應(yīng);蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)結(jié)構(gòu)類似的化合物,其響應(yīng)值幾乎僅與供試品的質(zhì)量有關(guān);二極管陣列檢測(cè)器可以同時(shí)記錄供試品的吸收光譜,故可用于供試品的光譜鑒定和色譜峰的純度檢查。
紫外、熒光、電化學(xué)和示差折光檢測(cè)器的響應(yīng)值與供試品溶液的濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,但蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的響應(yīng)值與供試品溶液的濃度通常呈指數(shù)關(guān)系,故進(jìn)行計(jì)算時(shí),一般需經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。
不同的檢測(cè)器,對(duì)流動(dòng)相的要求不同。如采用紫外檢測(cè)器,所用流動(dòng)相應(yīng)符合紫外-可見(jiàn)分光光度法(2010年版藥典二部附錄ⅣA)項(xiàng)下對(duì)溶劑的要求;采用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),還應(yīng)考慮有機(jī)相中有機(jī)溶劑的截止使用波長(zhǎng),并選用色譜級(jí)有機(jī)溶劑。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器通常不允許使用含不揮發(fā)性鹽組分的流動(dòng)相。
流動(dòng)相
反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相甲醇-水系統(tǒng)(采用紫外末端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),乙腈-水系統(tǒng)),如經(jīng)試用不適合時(shí),再選用其他溶劑系統(tǒng)。應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動(dòng)相,必須使用時(shí),應(yīng)盡可能選用含較低濃度緩沖液的流動(dòng)相。由于C18鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài),故對(duì)于十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的反相色譜系統(tǒng),流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例通常應(yīng)不低于5%,否則C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化,造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。
各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得改變外,其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等,均可適當(dāng)改變,以適應(yīng)供試品并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。其中,調(diào)整流動(dòng)相組分比例時(shí),以組分比例較低者(小于或等于50%)相對(duì)于自身的改變量不超過(guò)±30%且相對(duì)于總量的改變量不超過(guò)±10%為限,如30%相對(duì)改變量的數(shù)值超過(guò)總量的10%時(shí),則改變量以總量的±10%為限。
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