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免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的概述
免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)或稱免疫細胞化學(xué)(1CC)是根據(jù)特異性抗原抗體反應(yīng)的原理來定位組織或細胞內(nèi)的抗原或抗體成分。自1940年Coons創(chuàng)建了免疫熒光組化技術(shù)檢測冰凍切片中的相關(guān)抗原成分以來,已有60涂年的歷史。
免疫組織化學(xué)技術(shù)根據(jù)示蹤物的不同可構(gòu)成不同的免疫組織化學(xué)方法,如標記熒光素或熒光蛋白可構(gòu)成免疫熒光組化技術(shù);如標記酶(HRP或AKP)可構(gòu)成免疫酶組化技術(shù);如標記金或鐵可構(gòu)成免疫膠體金(銀)或膠體鐵技術(shù)。
1967年Nakane創(chuàng)建的免疫酶組織化學(xué)技術(shù)是目前開展免疫組織化學(xué)技術(shù)zui常用的方法。該技術(shù)是借助于抗體與抗原的特異性結(jié)合并利用酶作用底物所產(chǎn)生的顏色反應(yīng)來顯示抗原存在的一種技術(shù)。其基本原理與免疫熒光技術(shù)相同,是在免疫熒光技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,所不同的是免疫酶組織化學(xué)技術(shù)是用酶標記抗體。其方法是以酶作示蹤物,與抗原或抗體結(jié)合,然后根據(jù)酶與底物間產(chǎn)生的可溶性或不溶性顏色產(chǎn)物,借助于光鏡或電鏡觀察細胞及亞細胞水平的抗原或抗體的存在和分布。
Nakane等將辣根過氧化物酶(HRP)標記在抗體免疫球蛋白分子上,制成酶標抗體,成功地創(chuàng)建了酶標抗體技術(shù)。
1970年,Sternberger利用酶免疫學(xué)原理,建立了非標記抗體免疫過氧化物酶法,即PAP復(fù)合物法。自那以后,免疫酶組織化學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展,得到廣泛應(yīng)用,相繼出現(xiàn)了親和免疫組化技術(shù)、免疫堿性磷酸酶技術(shù)、多聚螯合物酶技術(shù)、自動免疫組織化學(xué)染色技術(shù)等新技術(shù)。它與免疫熒光技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
①不需要特殊顯微鏡,目前已成為zui常用的IHC方法,應(yīng)用廣泛;
②定位準確,對比度好;
③染色標本可長期保存;
④可用蘇木精等染料復(fù)染,便于與形態(tài)學(xué)相結(jié)合;
⑤顯色反應(yīng)的產(chǎn)物顏色易分辨,且電子密度大,便于光鏡及電鏡觀察;
⑥可根據(jù)酶和底物/供氫體的不同顯示不同的顏色,可非常容易地進行雙重或多重染色。
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