Invitrogen脂質(zhì)體2000 （11668-027）使用說明

產(chǎn)品名稱：脂質(zhì)體2000

貨號(hào)：11668-027

規(guī)格：0.75ml

脂質(zhì)體2000

Invitrogen脂質(zhì)體2000 （11668-027）描述：

Lipofectamine® 2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多用途轉(zhuǎn)染試劑，可在各種貼壁和懸浮細(xì)胞系中提供轉(zhuǎn)染。研究人員可使用Lipofectamine® 2000試劑進(jìn)行基于siRNA和shRNA的基因敲除實(shí)驗(yàn)及基因表達(dá)研究。Lipofectamine® 2000是Life Technologies提供的用于siRNA和質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的試劑。

采用Lipofectamine® 2000試劑，您可以實(shí)現(xiàn)：

• 在各種細(xì)胞系中具有的轉(zhuǎn)染效率和高重組蛋白表達(dá)水平 (表1)

• 出眾的siRNA和質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染性能

• 在血清存在時(shí)亦具有可靠的轉(zhuǎn)染效率 – 轉(zhuǎn)染后無(wú)需更換培養(yǎng)基

• 適用于高通量應(yīng)用的可靠性能

• 建立穩(wěn)定細(xì)胞系的*的選擇

I Invitrogen脂質(zhì)體2000 （11668-027）是廣大老師所熟知的轉(zhuǎn)染試劑，其特點(diǎn)：轉(zhuǎn)染步驟快速簡(jiǎn)便。以它為例，我們介紹一下脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的操作流程、注意事項(xiàng)等。

一、操作流程

事實(shí)上Lipofectamine系列產(chǎn)品操作流程都是又快又簡(jiǎn)單：稀釋DNA以及Lipofectamine 2000，混合2種稀釋液保溫20分鐘，加入培養(yǎng)細(xì)胞中孵育24－96小時(shí)檢測(cè)結(jié)果。下面是Invitrogen提供的詳細(xì)流程和注意事項(xiàng)。

1、轉(zhuǎn)染前一天，胰酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)，細(xì)胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90%。細(xì)胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中。

2、對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.8μg-1.0μg DNA。

3、對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000試劑。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘（在30分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。保溫時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細(xì)胞也可以使用D-MEM培養(yǎng)。如果D-MEM做為Lipofectamine 2000的稀釋液，必須在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。

4、混合稀釋的DNA（第2步）和稀釋的Lipofectamine 2000（第3步）。在室溫保溫20分鐘。 注意：溶液可能會(huì)混濁，但不會(huì)影響轉(zhuǎn)染。復(fù)合物可以在室溫保持6小時(shí)穩(wěn)定。

5、直接將復(fù)合物加入到每孔中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。注意：如果在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染，使用含血清的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞鋪板。在加入復(fù)合物前移去生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換為0.5ml無(wú)血清培養(yǎng)基。

6、在37℃，5％的CO2中保溫24-48小時(shí)，無(wú)須去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基或者在4-5小時(shí)后更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基也不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性。

7、在細(xì)胞中加入復(fù)合物24-72小時(shí)后，分析細(xì)胞抽提物或進(jìn)行原位細(xì)胞染色，檢測(cè)報(bào)告基因活性。這依賴于細(xì)胞類型和啟動(dòng)子活性。對(duì)穩(wěn)定表達(dá)，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細(xì)胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)需要數(shù)天或數(shù)周。

8、對(duì)于96孔板培養(yǎng)，不再需要提前一天進(jìn)行細(xì)胞鋪板，而可以直接在平板中制備復(fù)合物，然后將細(xì)胞懸浮液加入到復(fù)合物就可以了，這樣進(jìn)一步減少了轉(zhuǎn)染時(shí)間。這種改進(jìn)步驟已經(jīng)過293-H，293-F，COS-7L和CHO細(xì)胞的試驗(yàn)，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達(dá)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染使得Lipofectamine 2000非常適用于96孔板的高通量轉(zhuǎn)染，比如cDNA文庫(kù)的篩選和蛋白瞬時(shí)表達(dá)。

Invitrogen脂質(zhì)體2000 （11668-027）試劑銷售庫(kù)存現(xiàn)貨，保證，假一罰十！

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