RT4-D6P2T細胞（大鼠神經(jīng)雪旺氏細胞）如何復蘇

RT4-D6P2T細胞培養(yǎng)條件：The base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: fetal bovine serum to a final concentration of 10%.

RT4-D6P2T細胞幾種培養(yǎng)基的區(qū)別： 

1、MEM培養(yǎng)基:為*Eagle培養(yǎng)基(Minimal Essential Medium)，1959年修改配方，刪去賴氨酸、生物素，增加氨基酸濃度，適合多種細胞單層生長，是一種基本、適用范圍廣的培養(yǎng)基。雖然此培養(yǎng)基為大多數(shù)貼壁細胞所適用，但由于缺乏對特殊細胞的針對性，因而并非是某種特定細胞的*選擇。

2、DMEM培養(yǎng)基: 由Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基，各成份量加倍，分低糖(1000mg/L)與高糖(4500mg/L)。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好，常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞培養(yǎng)。

3、IMDM細胞培養(yǎng)基：是由Iscove's改良的Eagle培養(yǎng)基，增加了幾種氨基酸和胱氨酸量。它含有更高濃度的營養(yǎng)成分，適合于高密度細胞培養(yǎng)，如制備抗體時的雜交瘤細胞培養(yǎng)，以及無血清培養(yǎng)的基礎培養(yǎng)基。

4、F12培養(yǎng)基：Ham‘s F 12 nutrient medium動物細胞培養(yǎng)基，成分復雜，含有多種微量元素，初設計用于克隆二倍體的中國地鼠卵巢細胞。起初是作為一種無血清配方設計的，現(xiàn)在常補加血清用于支持各種正常的和轉化細胞的增殖。

5、DMEM/F12細胞培養(yǎng)基：由DMEM和F12細胞培養(yǎng)基按照1:1比例混合而成，營養(yǎng)成分豐富，且可以使用較少血清，可以作為無血清培養(yǎng)基的基礎培養(yǎng)基。

6、RPMI-1640細胞培養(yǎng)基：Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制，針對淋巴細胞培養(yǎng)設計，含BSS、21種氨基酸、維生素11種等，廣泛適于許多種正常細胞和腫瘤細胞，但尤其適合做淋巴瘤等懸浮細胞培養(yǎng)。

關于RT4-D6P2T細胞的復蘇需要注意幾點：

A. 整個復蘇過程盡量手腳麻利一些，戰(zhàn)線拉得太長可能影響復蘇效果；

B. 由于“化冰”這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里來的凍存管，放到水里可能會造成翻江倒海的既視感，所以，如果有些萌妹紙害怕的話，可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖；

C. 取凍存管時要謹防凍傷，尤其是夏天，盡管熱也好穿長袖白大褂，一些不經(jīng)意的動作可能會把你的小鮮肉“粘”到冰箱門上

D. 離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進行，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來的凍存液，然后直接加*培養(yǎng)基重懸細胞，接著把細胞轉到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng)。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈，但是就本俠的現(xiàn)有經(jīng)驗來看，似乎影響不大。更有甚者，冰化完后干脆不離心，也不洗DMSO，直接用凍存液重懸了細胞就放到培養(yǎng)皿/瓶，加*培養(yǎng)基混勻就放培養(yǎng)箱了，第二天來換個液就當一切都沒發(fā)生過，足夠、大氣、上檔次！童鞋們?nèi)绻麎驊?，也可以嘗試這種“懶人法”；

E. 復蘇第二天記得去看看細胞呀，如果狀態(tài)還不錯的話就說明復蘇成功啦；

后本俠還是要嘮叨一點細胞培養(yǎng)箱的重要性，如果培養(yǎng)箱不給力，就不要怪細胞不給面子。培養(yǎng)箱的道道很多，有機會本俠會出番外篇專門講培養(yǎng)箱，這兒呢就簡單說一些比較重要的注意點：1、培養(yǎng)箱里的水盤要一直有水，不然細胞會干死；2、培養(yǎng)箱上顯示的二氧化碳濃度要保持在5%，不然會導致PH異常，影響細胞生長；3、定期用酒精等擦洗培養(yǎng)箱內(nèi)部架子、水盤，防止污染發(fā)生。

RT4-D6P2T細胞，100%ATCC原代細胞，狀態(tài)好，傳代次數(shù)少。