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胎牛血清使用中,您可能遇到的問題.......

來源:生物試劑銷售中心   2018年12月10日 15:28  

   上海試劑銷售國內(nèi)胎牛血清服務(wù)商,我們不生產(chǎn)血清,只是血清的搬運(yùn)工!涉及到的血清品牌:SERANA、GIBCO、Hyclone、BI、Bovogen、Gemini、美國NTC、biowest、PAN、SIGMA、康寧、PAA……涉及到血清分類:南美源、北美源、澳洲源、超低Igg、透析型、活性炭處理、高脂、低脂型胎牛血清等,另外還有無外泌體血清、科研用人混合血清、人AB血清、馬血清、小牛血清、驢血清、雞血清、兔血清、大鼠血清等,購買,進(jìn)口胎牛血清,請聯(lián)系上海生物試劑銷售中心張昕!

1、如何選擇適合的血清?

國內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是很好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國外一般認(rèn)為GIBCOHYCLONE好,所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價(jià)格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細(xì)胞,國產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。選擇我司代理品牌德國SERANABOVOGEN胎牛血清,無疑是*,質(zhì)量穩(wěn)定、性價(jià)比高,有優(yōu)等級別、特級、碳吸附、透析型、超低IGg,滿足實(shí)驗(yàn)不同需求。

2 如何儲存和解凍血清不會(huì)使血清品質(zhì)受損?

將血清從冷凍箱取出后,先置于28使之融解,然后在室溫下使之全融。

但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

長時(shí)間儲存在2-8時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。

因此,推薦在-20以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融若存放于4時(shí),請勿超過1個(gè)月。

若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

3、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會(huì)影響品質(zhì)。

如要除去沉淀,離心(400g,1-2分鐘)或讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一無菌瓶中(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37就會(huì)再溶解。

所以,使用時(shí)搖動(dòng)并加熱血清至37,沉淀會(huì)自然消失。

4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:

(1) 解凍血清時(shí),請隨一邊解凍,一邊搖勻,使溫度及成分均一,減少沉淀產(chǎn)生。

(2) 血清分裝凍存時(shí),規(guī)則搖均(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20直接至37解凍,因溫度改變太大,易使蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56,30分鐘的原則,并且一邊熱滅火,一邊搖勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。

5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。

因?yàn)榭股睾脱逯械囊恍┏煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

6、為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。

7、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁。

然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。

如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):

(1) 細(xì)胞生長過老,破碎的細(xì)胞殘骸;

(2) 血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3) 配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長;

(4) 配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??捎秒x心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);

(5) 培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。

8、有必要做熱滅活嗎?

熱滅活血清對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。

經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。

而經(jīng)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點(diǎn),常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!

9、 細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

(2) 培養(yǎng)基無需37水浴。

(3) 培養(yǎng)基保持很好PH7.0- 7.2

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。

(5) 掌握細(xì)胞傳代的很好時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長過老。

10、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?

來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum,CS)采自出生1014 天的小牛。

各成分占比不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5-20,若存放在4不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí) ,應(yīng)先將血清至于2-8,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不可將冷凍的血清直接放入37水浴或者溫箱中,如放在37解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20保存,避免反復(fù)凍融。

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