小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)實驗
實驗方法原理    
直接從生物體內(nèi)獲取組織細(xì)胞進(jìn)行的培養(yǎng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是建立各種細(xì)胞系的步，是從事培養(yǎng)工作的人員應(yīng)熟悉和掌握的基本的技術(shù)。根據(jù)培養(yǎng)方法不同分為組織塊培養(yǎng)法和單層細(xì)胞培養(yǎng)法。
實驗材料    小鼠
試劑、試劑盒    DMEMDMEM胰酶PBS
儀器、耗材    飯盒紗布小剪子小鑷子大鑷子大燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6 孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器
實驗步驟    
一、實驗步驟

1. 將小鼠斷頸致死，置 75%酒精泡2-3 秒鐘，取肝臟，置于盛有 PBS 的平皿中。
 
2. 剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物，轉(zhuǎn)移到另一個盛有 PBS 液的平皿中。
 
3. 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約 1mm2)，玻片研磨，轉(zhuǎn)到離心管，離心(1000 rpm，5 min)。
 
4. 視組織或細(xì)胞量加額加入5-6 倍(3-5  ml)胰酶，37℃中消化 20 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次，或用吸 管吹打一次，使細(xì)胞分離。
 
5. 加入3-5 ml 含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。
 
6. 用100 目孔徑濾網(wǎng)濾過，除去未消化的大組織塊。
 
7. 再次離心5 min，棄上清液。
 
8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。
 
9. 加入含血清的培養(yǎng)液 l-2 ml (視細(xì)胞量)，血球計數(shù)板計數(shù)。
 
10. 將細(xì)胞調(diào)整到5×105/ml 左右，轉(zhuǎn)移至6 孔培養(yǎng)板中，37℃下培養(yǎng)。
 
收起 
注意事項    
1. 自取材開始，保持所有組織細(xì)胞處于無菌條件。細(xì)胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進(jìn)行。

2. 在超凈臺中，組織細(xì)胞、培養(yǎng)液等不能暴露過久，以免溶液蒸發(fā)。

3. 凡在超凈臺外操作的步驟，各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住，以防止細(xì)菌落入。

4. 操作前要洗手，進(jìn)入超凈工作臺后要用75％酒精或0.2％新潔爾滅擦拭手。試劑瓶口也要擦拭。

5. 點燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時間不能太長，以免退火，且冷卻后才能夾取組織。吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。

6. 操作動作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加污染機會。

7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分，工作臺面上的用品擺放要布局合理。

8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位。

9. 吸溶液的吸管等不能混用。