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人血管生長素(Angiogenin)試劑盒說明書

來源:上海西唐生物科技有限公司   2019年01月23日 10:27  

人血管生長素(Angiogenin)ELISA試劑盒

 (用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內)  

一、原理:

 本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 Angiogenin 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 Angiogenin與單抗結合,加入生物素化的抗人Angiogenin,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,Angiogenin濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中Angiogenin濃度。

二、試劑盒組成(2-8℃保存):

酶標板(Coated Wells

96

酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標準品(Standards):200ng/ml

1

底物工作液(TMB Solution

12ml

抗體工作液(Biotinylated Antibody

6ml

終止液Stop Solution

12ml

三、準備試劑與收集血樣:

  1. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
  2. 收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃-70 ℃)保存,避免反復凍融。血清、血漿至少作150稀釋(取10ul,加標本稀釋液490ul,稀釋50倍)。
  3. 標準品液配制:81.5ml離心管,管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在管中加入200ng/ml的標準品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
  4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

四、檢測程序:

  1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置3740分鐘。
  2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
  3. 每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應板充分混勻后置37℃20分鐘。
  4. 洗板:同前。
  5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3710分鐘。
  6. 洗板:同前。
  7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。
  8. 每孔加入100ul終止液混勻。
  9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

五、結果計算與判斷:

  1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算。如空白OD低于0.1,也可以直接計算。
  2. 以標準品20、105、2.5、1.250.625、0.312、0 ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,使用軟件作圖,畫出標準曲線。
  3. 根據樣品OD值計算出相應Angiogenin含量,再乘上稀釋倍數(shù)。軟件可以向本公司郵件索取。

六、試劑盒性能:

  1. 小的Angiogenin 檢測濃度小于0.16ng/ml。
  2. 特異性:可同時檢測重組或天然的人Angiogenin。不與人其它細胞因子有交叉反應。
  3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項:

  1. 以上標準孔及代測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。
  2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。
  3. 所有試劑都要恢復到室溫。板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
  4. 試劑盒使用超敏TMB溶液若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物,屬正?,F(xiàn)象,不影響結果判讀
  5. 說明書中試劑盒組成為96T的量,48T的量應減半!
  6. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。僅用于科研,不能用于臨床診斷!

 

 

 

 

 

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