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乳果糖檢測(cè)不再是難題，安譜實(shí)驗(yàn)助力復(fù)原乳鑒定
A：近保健品質(zhì)量亂象頻頻被曝，感覺走親訪友還是送乳制品比較放心，但是市面上乳制品品牌眾多，我們也不太清楚如何區(qū)分哪些乳制品中添加了復(fù)原乳？
B：NY/T 939-2016“巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中復(fù)原乳的鑒定”中指出可以通過乳果糖含量來判斷巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中是否添加復(fù)原乳。
C：2018年2月發(fā)布的國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳、和復(fù)原乳鑒定次討論稿中滅菌乳標(biāo)準(zhǔn)中乳果糖含量作為理化指標(biāo)被要求；復(fù)原乳鑒定標(biāo)準(zhǔn)中完善了乳果糖測(cè)定方法中的試劑配制。
D：那么到底如何測(cè)定乳果糖來鑒定復(fù)原乳呢？
聚光科技（杭州）股份有限公司下屬子公司上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司（以下簡(jiǎn)稱“安譜實(shí)驗(yàn)”）利用快速檢測(cè)試劑盒的方法對(duì)乳果糖進(jìn)行檢測(cè)并提供全套解決方案和試劑耗材。
配套產(chǎn)品，一鍵采購(gòu)試劑盒，解決繁瑣采購(gòu)
搭配乳果糖和D- 果糖分析物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；
試劑盒滿足50次檢測(cè)，避免拼湊購(gòu)買造成的浪費(fèi)；
提供試劑盒內(nèi)試劑的單獨(dú)購(gòu)買；
方便、快捷、省時(shí)
直接提供預(yù)配置的測(cè)試液，避免繁瑣的配制；
試劑盒方法原理同NYT 939-2016；
和NY/T 939-2016方法相比，試劑盒方法節(jié)省3h，完成反應(yīng)僅需2h；
Megazyme Mega-CalcTM一鍵數(shù)據(jù)處理，準(zhǔn)確、方便；
安譜實(shí)驗(yàn)提供人性化選購(gòu)、咨詢、售后等客戶體驗(yàn)服務(wù)
吸光度不穩(wěn)定、平行性不好、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度不高、實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)把握不好，通通不是問題，安譜實(shí)驗(yàn)資深技術(shù)人員手把手指導(dǎo)和解答。
取某品牌市售純牛奶（記為原奶），并將其分別稀釋2倍，5倍，10倍（記為原奶*2，原奶*5，原奶*10）待取用；分別取原奶、原奶*2，原奶*5，原奶*10、和100 ppm標(biāo)準(zhǔn)品各0.5 mL于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL磷酸鈉緩沖液、0.7 mL去離子水、0.05 mL硫酸鋅溶液、0.05 mL亞鐵氰化鉀溶液，混合均勻，在13000轉(zhuǎn)速下離心10 min，沉淀牛奶中的蛋白質(zhì)和脂肪，吸取上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
離心后溶液應(yīng)該為澄清的溶液，否則建議稀釋樣品或者再分別加入0.05 mL沉淀試劑：硫酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液（為避免誤差，加入沉淀劑的情況也請(qǐng)考慮沉淀劑對(duì)樣品的稀釋影響）；
樣品沉淀以后應(yīng)該為澄清的溶液，取上清液時(shí)注意不要將沉淀吸入。
檢測(cè)樣品包括：
| 樣品 | 原奶 | 原奶*2 | 原奶*5 | 原奶*10 | 100ppm標(biāo)品 | |||||
| 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | ||||||
| 編號(hào) | A | B | C | D | E | F | G | H | I | J |
| A空白 | B空白 | C空白 | D空白 | E空白 | F空白 | G空白 | H空白 | I空白 | J空白 | |
二、酶解實(shí)驗(yàn)
分別吸取0.5 mL的上清液于1.5 mL的離心管中（其中編號(hào)A-J為樣品，加入β-半乳糖苷酶進(jìn)行酶解；A空白-J空白為空白樣，不加β-半乳糖苷酶；空白樣的目的是扣除空白）。
每個(gè)樣品分別按照以下步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：
| 添加溶液 | 添加體積數(shù) | |
| A-J 樣品 | A-J 空白 | |
| 樣品前處理后的上清液 | 0.50 mL | 0.50 mL |
| 乙酸鈉緩沖液（0.2 M） | 0.10 mL | 0.10 mL |
| 去離子水 | - | 0.05 mL |
| 瓶1（β-半乳糖苷酶） | 0.05 mL | - |
| 漩渦混合，并于40℃水浴中反應(yīng)1小時(shí)，然后分別加入以下溶液，每加一個(gè)溶液，要蓋上螺帽進(jìn)行漩渦混合。 | ||
| TEA緩沖液（1 M）/硫酸鎂（10 mM） | 0.50 mL | 0.50 mL |
| 氫氧化鈉溶液（0.33 M） | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 辛醇 | 0.01 mL | 0.01 mL |
| 瓶2懸浮液（葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶） | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 30%過氧化氫 | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 加完后蓋上螺帽于40℃水浴中反應(yīng)15min，15min后于13000rmp離心10min，取上清液作為酶測(cè)試反應(yīng)。注意：加入過氧化氫后不管是樣品還是樣品空白會(huì)產(chǎn)生氣泡，無氣泡產(chǎn)生說明實(shí)驗(yàn)可能失敗。 | ||
三、酶測(cè)試反應(yīng)
| 添加溶液 | 添加體積數(shù) | |
| A-J 樣品 | A-J 空白 | |
| 樣品酶解實(shí)驗(yàn)后的上清液 | 1.00mL | 1.00 mL |
| 瓶3緩沖液 | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 瓶4稀釋液（NADP+/ATP) | 0.05 mL | 0.05 mL |
| 將上述溶液分別加入一次性的比色皿中，每加一個(gè)溶液蓋上比色皿蓋子手動(dòng)搖晃均勻，然后反應(yīng)3min，在340nm處檢測(cè)紫外吸光度，讀數(shù)為A1，然后加入以下溶液進(jìn)一步反應(yīng)。 | ||
| 瓶5懸浮液（HK/G-6-PDH) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 瓶6懸浮液（6-PGDH) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 每加一個(gè)溶液蓋上比色皿蓋子手動(dòng)搖晃均勻，然后反應(yīng)10min，在340nm處檢測(cè)紫外吸光度，讀數(shù)為A2，然后加入以下溶液進(jìn)一步反應(yīng)。 | ||
| 瓶7懸浮液（PGI) | 0.02 mL | 0.02 mL |
| 加入以上溶液手動(dòng)搖晃均勻，然后反應(yīng)15min，在340nm處檢測(cè)紫外吸光度，讀數(shù)為A3。注意：在檢測(cè)紫外吸光度A1-A3過程中，吸光度的大小會(huì)在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，波動(dòng)過大或者不穩(wěn)定請(qǐng)排查各個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟，找出問題。 | ||
四、數(shù)據(jù)分析
將測(cè)試的數(shù)據(jù)代入乳果糖試劑盒的Megazyme Mega-CalcTM進(jìn)行計(jì)算（在Megazyme下載），得出檢測(cè)數(shù)據(jù)：
| 樣品 | 原奶 | 原奶*2 | 原奶*5 | 原奶*10 | 100ppm標(biāo)品 | |||||
| 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | 兩個(gè)平行樣 | ||||||
| 編號(hào) | A | B | C | D | E | F | G | H | I | J |
| 計(jì)算終濃度（ppm） | 474.6 | 472.2 | 484.8 | 487.4 | 484 | 499.7 | 493.7 | 500.9 | 97.3 | 101.6 |
| 平均值 | 473.4 | 486.1 | 491.8 | 497.3 | 99.5 | |||||
| 結(jié)論 | A3-A2＞1.5，需對(duì)樣品進(jìn)行稀釋；檢測(cè)值偏低 | 樣品稀釋2倍，5倍，10倍后通過Megazyme Mega-CalcTM進(jìn)行計(jì)算，換算為原奶含乳果糖濃度，相互比較，誤差都在2%以內(nèi)，符合檢測(cè)要求。 | 平行樣檢測(cè)的數(shù)值與標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度相符，平行樣差值低于1%。 | |||||||
產(chǎn)品信息
| 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| CFHN-K-LACTUL | 乳果糖分析試劑盒 | 50 assays | 3104 |
| CFEQ-4-120084-0250 | 磷酸氫二鈉，ACS， | 250g | 436 |
| CFEQ-4-120023-0250 | 磷酸二氫鈉一水化合物，ACS，Reag. Ph. Eur.，98.0-102.0% | 250g | 210 |
| CFEQ-4-198525-1000 | 無水硫酸鎂，≥98.0%，for analysis，粉末狀 | 1kg | 463 |
| CFEQ-4-198528-0500 | 無水乙酸鈉，(Reag. Ph. Eur.) ACS，≥99.0% | 500g | 490 |
| CFEQ-4-111615-0500 | 三乙醇胺，≥99.0% | 500ml | 144 |
| CFEQ-4-120033-0250 | 亞鐵氰化鉀三水合物，for analysis，98.0% | 250g | 353 |
| CFEQ-4-120050-0250 | 硫酸鋅七水化合物，ACS，ISO， | 250g | 419 |
| CFEQ-4-120045-0500 | 氫氧化鈉，for analysis ，≥ 97.0% | 500g | 342 |
| CFEQ-4-531046-0005 | 1-辛醇，≥98.0% | 5mL | 88 |
| CFEQ-4-110013-0500 | 雙氧水（過氧化氫）， 27% w/w | 500mL | 275 |
| AGEQ-2722120 | CUVETTES 1.6ml 一次性UV 比色皿，半微量池、100/盒 | 100/盒 | 430 |
| AGEQ-2722110 | CUVETTES 4.0ml 一次性UV 比色皿、100/盒 | 100/盒 | 380 |
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