信帆生物明膠酶譜法分析試劑盒發(fā)表的文獻！


描述：基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解 細胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組 織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視  。

 

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測 MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電 泳， 電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng) Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮區(qū)域，從而能同時指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應(yīng)緩沖液，可檢測少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性，檢 測靈敏度~1 nM。試劑盒可進行 50 次標準小膠檢測，如果小膠加樣孔為 10~15個，則總計可檢測 500~750 個樣品。


明膠酶譜分析試劑盒發(fā)表的文獻：

《綠茶多酚EGCG增強動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其相關(guān)機制研究》

 部分綠茶多酚EGCG增強高脂飲食喂養(yǎng)ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性目的:急性冠脈綜合征(Acute coronary syndrome,ACS)是指一系列嚴重的急性心肌缺血性疾病,主要包括不穩(wěn)定型心絞痛以及急性ST段抬高或非ST段抬高型心肌梗死。目前大量研究資料已證實,急性冠脈綜合征發(fā)病的主要病理生理基礎(chǔ)是冠狀動脈中不穩(wěn)定型動脈粥樣硬化斑塊的破裂,引起冠狀動脈內(nèi)急性血栓形成,繼而引起心肌嚴重的缺血、缺氧。近年來,多項流行病學研究報道稱,飲用綠茶可以明顯降低冠心病的發(fā)病率。綠茶的抗動脈粥樣硬化作用主要原因是綠茶中含有大量的多酚類化合物,其中含量多的為兒茶素。

綠茶中兒茶素主要成分包括表兒茶素(EC),表兒茶素沒食子酸酯(ECG),表沒食子兒茶素(EGC)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。在這些成分中,以EGCG含量豐富,活性zui強,已被證明具有多種藥理學作用和生物學特性。我們進行本研究主要目的就是為了證實綠茶多酚EGCG是否能夠增強高脂飲食喂養(yǎng)ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性并探討其可能的相關(guān)機制。方法:30只雄性ApoE缺陷小鼠(6周齡,體重18-20g)被隨機分為對照組(n=15)以及EGCG組(n=15)這些小鼠均使用含有21%脂肪以及0.15%膽固醇的高脂飲食喂養(yǎng)。

EGCG組以及對照組分別給予EGCG(10mg)或者同等劑量的0.9%生理鹽水進行腹腔注射共16周。隨后麻醉處死小鼠,取小鼠頭臂干動脈并予固定石蠟包埋。小鼠頭臂干橫切面進行HE染色以及Masson染色分別評估動脈粥樣硬化斑塊形態(tài)以及膠原含量。此外,使用免疫組織化學染色的方法分析小鼠斑塊中巨噬細胞以及平滑肌細胞成分的比例。蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)用來檢測斑塊中蛋白表達水平,明膠酶譜法用來檢測斑塊中基質(zhì)金屬蛋白酶的活性。

后,我們用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測小鼠血清炎癥因子單核細胞趨化因子-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)以及干擾素-γ(IFN-γ)水平。

結(jié)果:高脂飲食喂養(yǎng)16周后,ApoE缺陷小鼠頭臂干動脈近端橫切面HE染色可見明顯的動脈粥樣硬化斑塊形成,提示造模成功。另外,與對照組相比,EGCG組ApoE缺陷頭臂干動脈近端粥樣硬化病變程度明顯減輕。Masson染色結(jié)果提示,EGCG干預(yù)后動脈粥樣硬化斑塊中膠原成分明顯增加。免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)EGCG組斑塊中巨噬細胞比例明顯降低,而斑塊中平滑肌成分顯著增高。

此外,Western blot檢測發(fā)現(xiàn)EGCG可以顯著降低ApoE缺陷小鼠斑塊中基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN)的表達。同樣,明膠酶譜法結(jié)果提示EGCG組斑塊中MMP-2和-9活性較對照組明顯減低。后,與對照組相比,EGCG腹腔注射后,ApoE缺陷小鼠血清炎癥因子MCP-1、IL-6、TNF-α以及IFN-γ水平顯著降低。

結(jié)論:本研究結(jié)果提示,綠茶多酚EGCG能夠增強高脂飲食喂養(yǎng)ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性。此外,EGCG增強斑塊穩(wěn)定性的內(nèi)在機制可能與其抑制多種炎癥因子、基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子以及機制金屬蛋白酶表達有關(guān)。 

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