做試驗對許多人來說都是不生疏的，究竟許多人在讀高中的時分會經(jīng)常做各種試驗。而現(xiàn)在許多時分想要得到自己的數(shù)據(jù)，就需要不斷的做運用。酶聯(lián)免疫吸附試驗也是經(jīng)常做的，盡管簡 單，但是操作的時分也不能大意。下面就來介紹一下酶聯(lián)免疫吸附試驗操作時都有哪些注意要點？ 1 標(biāo)本的采納和保存 可用作elisa測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其間某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進行測定（如血清、尿 液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均平等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而 血清標(biāo)本只需待血清天然凝結(jié)、血kuai縮短后即可獲得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可平等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按慣例辦法收集，應(yīng)注意防止 溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標(biāo)本或許會增加非特異性顯色。 血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中或許含有內(nèi) 源性HRP，也會發(fā)作假陽性反響。如在冰箱中保存過久，其間的可發(fā)作聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超越一周測定的需低溫冰 存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上激烈振動?；鞚峄蛴谐练e的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢 測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作屢次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應(yīng)注意無菌操作，也可參加適當(dāng)防腐劑。 2 試劑的準(zhǔn)備 按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備試驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試 劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。 3 加樣 在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并注意不行濺起，不行發(fā)作氣泡。 加標(biāo)本一般用微量 加樣器，按規(guī)定的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)作交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度 稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其間參加血清標(biāo)本，然后在微型震動器上震動1分鐘以確?；旌?。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器，使加液進程迅速完 成。 4 保溫 在ELISA中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反響的完成需要有一定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA中 似不恰當(dāng)。 ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的時機，只有貼近 孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐漸平衡的進程，因而需經(jīng)擴散才干到達反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這便是為什么ELISA反響 總是需要一定時刻的溫育。 溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時，試驗表 明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)品的生成可達高峰。為加速反響，可提高反響的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反響4℃更為*，在放射 免疫測定中多使反響在冰箱中過夜，以構(gòu)成較多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。