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國產(chǎn)電色譜系統(tǒng)可分離蛋白質(zhì)及多肽你知道嗎？
國產(chǎn)電色譜系統(tǒng)可分離蛋白質(zhì)及多肽你知道嗎？
國產(chǎn)電色譜系統(tǒng)是一種集毛細管電泳（HPCE）和液相色譜（HPLC）的分離機制于一體的方法，它的溶質(zhì)流動是通過一個電驅(qū)動原理，分離機制是不僅依靠溶質(zhì)—固定相間的反應(yīng)作用，還有電滲流的作用。在普通的毛細管電色譜模式中，毛細管填充了化學(xué)改性的硅膠顆粒，固定相如同HPLC中一樣。一個柱塞，置于溶質(zhì)到達檢測窗口之前的位置，以用于阻止固定相的流失和光信號的失真。塞子和固定相顆粒都可能導(dǎo)致氣泡的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致電滲流的中斷，為了大限度地減少氣泡產(chǎn)生的可能性和排除堵塞，這在小直徑的管子內(nèi)是很困難的，因此發(fā)展了一種在毛細管內(nèi)壁蝕刻的毛細管電色譜方法，這個過程同在氣相色譜中為了增加毛細管柱內(nèi)壁表面積而涂上一層聚合物的方法相似，在控制的溫度和反應(yīng)時間下使用了二氟化氫銨作蝕刻劑。較早的研究描述在300-400℃時蝕刻毛細管3-4小時，這些條件明顯地增加了表面積，從而充分地增大了蛋白質(zhì)、多肽和四環(huán)素與十八烷基固定相間的分配因子（在溶質(zhì)和蝕刻柱內(nèi)壁上的有機部分之間）。
用有機物蝕刻毛細管的方法是以硅烷化—氫化硅烷化反應(yīng)為基礎(chǔ)的，在這個過程中，毛細管中被蝕刻過的表面先同三乙氧基甲硅烷反應(yīng)，以產(chǎn)生一個氫化物表面，在理想的條件下，一單層三乙氧基甲硅烷被沉淀在柱子表面，以致大部分硅烷醇被氫化物取代，然后通過注入一種含有烯烴的溶劑和一種適合的催化劑，如六氯鉑酸，讓其流過毛細管，有機成分就立即被附在氫化物上，這個過程被稱作氫化硅烷化過程，在前面的研究中，被使用的烯烴為1-十八烯烴，硅烷化-氫化硅烷化反應(yīng)方法也被用于毛細管電泳中未蝕刻的毛細管柱，以涂附丙烯酰胺聚合物。鍵合方法的一個好處是在有機部分和表面間形成了一穩(wěn)定的硅—碳鍵合層。實驗證明聚合丙烯酰胺毛細管通過氫化物間接鍵合比有機硅烷化更穩(wěn)定，在這個研究中，被蝕刻的毛細管首先被氫化物介質(zhì)鍵合，隨后和7-辛烯基-1，2-二醇(7-OD)或1-十八烯烴反應(yīng)，以產(chǎn)生適合于電色譜的柱子，在HPLC中7-OD鍵合材料已經(jīng)表現(xiàn)出了比二醇基更小的疏水性，以致在用毛細管電色譜分離混合物產(chǎn)生更適合的特性，在這些混合物中，一個適合的介于疏水性和親水性間的平衡是*的，例如生物分子。
電色譜過程：二醇基和十八烷基毛細管柱先進行預(yù)處理，由注射泵注入十倍柱體積的緩沖溶劑通過柱子，流動相要先經(jīng)過超聲波脫氣處理，然后用氦氣清潔。電動進樣在5KV電壓下，6秒完畢，所有樣品均在211nm下檢測。
研究結(jié)果表明關(guān)于在化學(xué)改性蝕刻柱上溶質(zhì)—鍵合相作用的研究，它不同于傳統(tǒng)方法，是電色譜的另一種方式，原因在于它以開口管結(jié)構(gòu)代替了填充柱，實驗的結(jié)果表明了鍵合蝕刻柱同空管柱相比具有明顯不同的保留特性，另外，不同的有機成分涂附在蝕刻過的表面，分離的能力也會不同，如同HPLC中依賴不同的化學(xué)鍵合配位體一樣，這種方式的電色譜的另一些基本特性以及各種各樣化學(xué)改性蝕刻柱制作的進一步研究正在取得進展。
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