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人ELISA試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高

來(lái)源:通蔚試劑(上海)有限公司   2019年04月18日 08:50  

  人ELISA試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高,因而含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法實(shí)驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn),重復(fù)性亦佳。直接包被的另一長(zhǎng)處是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可選用。例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而遍及的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。

辦法一 用于檢測(cè)不知道抗體的直接法: 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗刷3次。人ELISA試劑盒加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被的反響孔中置37℃孵育1小時(shí)洗刷。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
于反響孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。

將抗原或抗體固定在過(guò)程稱為包被。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體外表的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的效果。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、人ELISA試劑盒濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán),因而更易吸附到固相載體外表。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,因而抗體的包被一般均選用直接吸附法。

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