聽(tīng)說(shuō)同學(xué)們的養(yǎng)的細(xì)胞常常因?yàn)楦鞣N原因一再受損或者死亡，今天小秋拿出畢生功力，為大家講述細(xì)胞培養(yǎng)中那些你可能忽略的小細(xì)節(jié)

細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源

針對(duì)大多數(shù)腫瘤細(xì)胞，營(yíng)養(yǎng)配方一般為：90%合成培養(yǎng)基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);為了防止污染，可以加1%雙抗!

常見(jiàn)問(wèn)題解答：

Q：針對(duì)不同細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基配方一樣嗎?如何獲知呢?

A：不同細(xì)胞的培養(yǎng)基是不同的。在小秋家購(gòu)買的細(xì)胞，針對(duì)不同細(xì)胞株，會(huì)有詳細(xì)介紹，包括生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。

Q：培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?

A：因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅來(lái)顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會(huì)由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)后，變黃后就暗示我們要換培養(yǎng)基啦!所以密切觀察很重要哦!

Q：大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，那可以替換嗎?

A：不建議更換的培養(yǎng)基，因?yàn)楫?dāng)培養(yǎng)基改變時(shí)，細(xì)胞的性質(zhì)可能也會(huì)變化。

Q：若是細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，是否可以增加血清比例?

A：可以!

細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境舒適無(wú)菌的環(huán)境是細(xì)胞健康成長(zhǎng)的基礎(chǔ)。如下圖為培養(yǎng)細(xì)胞的器皿，包括形狀、規(guī)格、用途多樣的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)板。終住進(jìn)37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱。常見(jiàn)問(wèn)題解答：

Q：細(xì)胞培養(yǎng)板規(guī)格不一，如何正確選用?
A：根據(jù)不同規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng)皿/板容量及用途，如流式一般用 6 孔，爬片一般用 24 孔，MTT 一般用 96 孔等。

Q：細(xì)胞培養(yǎng)皿和培養(yǎng)瓶區(qū)別?
A：就細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)來(lái)說(shuō)，培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿沒(méi)有太大區(qū)別，主要在于安全系數(shù)(培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量(大培養(yǎng)瓶>培養(yǎng)皿)。但是培養(yǎng)瓶成本也會(huì)相對(duì)較高，因此無(wú)特殊要求，一般選擇培養(yǎng)皿即可。

細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存
細(xì)胞復(fù)蘇：指將凍存的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)的過(guò)程。復(fù)蘇過(guò)程如下圖所示：

常見(jiàn)問(wèn)題解答：Q：為什么細(xì)胞復(fù)蘇后，很多難以貼壁?
A：忽略培養(yǎng)基的問(wèn)題，主要考慮細(xì)胞凍存時(shí)狀態(tài)差或者復(fù)蘇時(shí)動(dòng)作太慢導(dǎo)致細(xì)胞死亡。切記重要的融化速度要快，可不時(shí)搖動(dòng)冷凍管，使之盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5～0℃)。Q：為什么細(xì)胞貼壁了，卻長(zhǎng)不起來(lái)?
A：此時(shí)需要考慮的是細(xì)胞密度問(wèn)題，一些細(xì)胞傾向于維持一定的密度，若復(fù)蘇的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，可將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存：將細(xì)胞放在低溫環(huán)境(-70℃~-196℃)，細(xì)胞內(nèi)的代謝降低，可大限度的保存細(xì)胞活力，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

常見(jiàn)問(wèn)題解答：
Q：目前細(xì)胞凍存液多采用的什么配方?

A：目前細(xì)胞凍存液的配方有很多種，如培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 這里小秋推薦使用HAKATA無(wú)血清細(xì)胞凍存液，無(wú)需程序降溫，細(xì)胞存活率和活力高達(dá)90%-98%，適用于干細(xì)胞凍存及無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞。

Q：若沒(méi)有細(xì)胞凍存盒，我們?cè)撛趺崔k?

A：可先將凍存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或過(guò)夜，后放入液氮罐內(nèi)。為了節(jié)約時(shí)間，還可直接在凍存盒外包裹一團(tuán)棉花，用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點(diǎn)，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過(guò)夜，再轉(zhuǎn)移至液氮保存。

Q：細(xì)胞凍存時(shí)對(duì)細(xì)胞量有要求嗎?

A：細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)會(huì)有一定的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，起始濃度106—107個(gè)/ml/管;

今天的內(nèi)容就到這里了，細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)節(jié)可馬虎不得，希望大家可以結(jié)合這些小技巧，將細(xì)胞養(yǎng)的更漂亮！

按照慣例，文末是時(shí)候放大招了：

好細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵——傳秋生物人源細(xì)胞均可提供STR鑒定，并且提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)支持，讓你的實(shí)驗(yàn)*！

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好了各位同學(xué)們，

為了能讓你們畢業(yè)，小秋也是費(fèi)盡了心思，

但我也只能幫你們到這里了，

至于能不能畢業(yè)，就靠你們自己了...

你們懂我意思吧？