細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存
細(xì)胞復(fù)蘇：指將凍存的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長的過程。

復(fù)蘇過程如下圖所示：

常見問題解答：

Q：為什么細(xì)胞復(fù)蘇后，很多難以貼壁?

A：忽略培養(yǎng)基的問題，主要考慮細(xì)胞凍存時狀態(tài)差或者復(fù)蘇時動作太慢導(dǎo)致細(xì)胞死亡。切記重要的融化速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過易受損的溫度段(-5～0℃)。

Q：為什么細(xì)胞貼壁了，卻長不起來?

A：此時需要考慮的是細(xì)胞密度問題，一些細(xì)胞傾向于維持一定的密度，若復(fù)蘇的細(xì)胞生長緩慢，可將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶/皿中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存：將細(xì)胞放在低溫環(huán)境(-70℃~-196℃)，細(xì)胞內(nèi)的代謝降低，可大限度的保存細(xì)胞活力，以便長期儲存。

常見問題解答：
Q：目前細(xì)胞凍存液多采用的什么配方?

A：目前細(xì)胞凍存液的配方有很多種，如培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 這里小秋推薦使用HAKATA無血清細(xì)胞凍存液，無需程序降溫，細(xì)胞存活率和活力高達(dá)90%-98%，適用于干細(xì)胞凍存及無血清培養(yǎng)細(xì)胞。

Q：若沒有細(xì)胞凍存盒，我們該怎么辦?

A：可先將凍存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或過夜，后放入液氮罐內(nèi)。為了節(jié)約時間，還可直接在凍存盒外包裹一團(tuán)棉花，用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點(diǎn)，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，再轉(zhuǎn)移至液氮保存。

Q：細(xì)胞凍存時對細(xì)胞量有要求嗎?

A：細(xì)胞復(fù)蘇時會有一定的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，起始濃度106—107個/ml/管;