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牛血清白蛋白在免疫檢測(cè)過(guò)程中起到什么作用
在免疫檢測(cè)過(guò)程中，需要將抗體固定在固相表面，如微孔板，磁顆粒、聚苯乙烯微球或硝酸纖維膜表面。由于蛋白是一種粘性較大的分子，檢測(cè)過(guò)程中，樣本中的雜蛋白會(huì)與固相表面的疏水位點(diǎn)發(fā)生非特異性結(jié)合，造成背景干擾。因此，需要將固相表面的多余位點(diǎn)用封閉劑將其封閉，常用的封閉劑，如BSA、酪蛋白、明膠等能夠吸附在固相表面，防止抗體、或者抗原與固相表面發(fā)生非特異性結(jié)合，降低檢測(cè)本底，提高靈敏度。
牛血清白蛋白是一種球蛋白，分子量約為66.5kDa，表面含有大量的氨基和羧基殘基，并且BSA的空間結(jié)構(gòu)能夠隨著溫度、pH、鹽濃度發(fā)生變化，是一種柔性分子。作為常見(jiàn)的封閉蛋白，BSA能夠與親水表面、疏水表面，以及活化的共價(jià)結(jié)合表面，如活化羧基、氨基、環(huán)氧基、甲苯磺?；冉Y(jié)合，抑制非特異性吸附，是一種理想的固相封閉劑。
牛血清白蛋白表面含有大量的羧基、氨基，能夠用于表面的活化基團(tuán)結(jié)合，封閉多余位點(diǎn)，為常見(jiàn)的是化學(xué)發(fā)光免疫磁珠偶聯(lián)抗體當(dāng)中的應(yīng)用。如用EDC活化羧基表面磁珠后，能夠和抗體表面氨基反應(yīng)，使抗體共價(jià)結(jié)合在磁珠表面。這一過(guò)程需要對(duì)多余的活化羧基位點(diǎn)進(jìn)行封閉，BSA分子尺寸更小，能夠進(jìn)入到表面抗體間的間隙，并且由于表面含有大量的氨基，與活化羧基反應(yīng)，封閉多余的活性位點(diǎn)。同時(shí)，BSA表面含有大量的羧基，還能夠改善磁珠的親水性。另外，BSA表面含有一定的氨基酸疏水殘基，如丙氨酸、亮氨酸等，也能夠?qū)Ρ砻娴氖杷稽c(diǎn)進(jìn)行封閉。
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