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HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問題
柱前衍生被測組分通過衍生化反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為衍生化產(chǎn)物，然后再經(jīng)過色譜柱進行分離。液相色譜法中柱前衍生的目的是:通過衍生化反應(yīng)，使原來不能直接被檢測的組分轉(zhuǎn)化為能被所用檢測器檢測的物質(zhì);使被測組分與衍生化試劑有選擇地參加反應(yīng)，而與樣品中的其他組分分離;改變被測組分在色譜柱的出峰次序，使之更有利于分離。柱前衍生的點是可以不必嚴(yán)格限制衍生化反應(yīng)條件，可以允許較長的反應(yīng)時間及使用各種形式的反應(yīng)器。其缺點是當(dāng)一個復(fù)雜組分樣品經(jīng)過衍生化反應(yīng)后，有可能產(chǎn)生多種衍生化產(chǎn)物，給色譜分離帶來困難。
柱后衍生利用衍生反應(yīng)使被測物與相應(yīng)的試劑反應(yīng)，以改變其物理或化學(xué)性質(zhì)，使其被檢測到。例如將發(fā)色基團或熒光基團鍵合到樣品中去，多放大檢測靈敏度，柱后衍生系統(tǒng)開創(chuàng)了柱后衍生系統(tǒng)性能、價格及外形的標(biāo)準(zhǔn)。
HPLC柱前衍生和柱后衍生的相關(guān)問題？1）為什么要衍生？2）衍生化的分類？3）進行衍生，適用的化合物有哪些？4）進行衍生化的要求有哪些？5）柱前衍生和柱后衍生的缺點？
答：色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過程中用的化學(xué)試劑（一般稱為衍生化試劑或標(biāo)記試劑）使樣品成分轉(zhuǎn)變相應(yīng)的衍生物之后進行分離檢測或進行檢測的方法。目的為：
1．將紫外—可見吸收功能基團引入被檢測對象或?qū)⑵滢D(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?，以提檢測靈敏度；
2．提對分析樣品的分離和選擇性。
從是否與HPLC系統(tǒng)聯(lián)機的角度，化學(xué)衍生法分為在線（on line）與離線（Off line）兩種。從發(fā)生衍生化的場合，分為柱前衍生法（pre-columnderivatization）與柱后衍生法（post-columnderivatization）兩種。
目前，在HPLC中，以離線的柱前衍生法（簡稱柱前衍生法）與在線的柱后衍生法（簡稱柱后衍生法）使用居多。
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