上海仁捷生物科技有限公司的ELISA試劑盒質(zhì)量可靠 靈敏度高 效果穩(wěn)定 實驗效果好.那做做ELISA實驗時要注意那些問題呢？下面就一起來探討了解一下吧！

　　一 樣品稀釋

　　一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性.

　　二 試劑盒平衡

　　Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

　　三 樣品和試劑的混勻

　　在稀釋前 后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性.

　　四 加樣

　　加樣是一項很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.

　　五 溫育

　　溫育是ELISA中影響成敗的為關(guān)鍵因素.ELISA作為一種固相免疫,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間.

　　六 洗板

　　固相免疫技術(shù)是一種非均相免疫技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA的特異性.洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干；及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結(jié)果.

　　七 顯色

　　顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時間過短,結(jié)果偏低；顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.

　　八 比色

　　比色要注意波長的選擇.以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時更換.因此,容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題.