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Q：我從液氮中取出小瓶Huh7細(xì)胞，然后在37℃進(jìn)行10分鐘解凍，然后加入培養(yǎng)基+ 10％FBS，以1000rpm離心5分鐘以除去DMSO，然后將沉淀重新懸浮于新鮮培養(yǎng)基中。然后培養(yǎng)它?，F(xiàn)在差不多4天了，但細(xì)胞沒有貼壁。大家能告訴我為什么細(xì)胞沒有貼壁嗎？
當(dāng)我凍存細(xì)胞時，我將它們放入-80℃3天，然后將它們轉(zhuǎn)移到液氮中。
A：我傾向于認(rèn)為未成長的原因如下：
1細(xì)胞在解凍期死亡
2細(xì)胞凍存不當(dāng)
3污染
4使用不適當(dāng)?shù)募?xì)胞生長培養(yǎng)基
細(xì)胞在37°C解凍的10分鐘可能有點(diǎn)長。通常，如果使用水浴，3分鐘就足夠了。
關(guān)于細(xì)胞凍存，我認(rèn)為在-80°C過夜就夠了，然后轉(zhuǎn)移至液氮中，不需要在-80°C放置三天。
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