上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法

每當暑假一到,我都會很高興.想到有兩個月的時間可以不用上課,那簡直就是一年當中美好的時光了.　　每當暑假一到,我都會很高興.想到有兩個月的時間可以不用上課,那簡直就是一年當中美好的時光了.　小編接下來介紹　兔ELISA試劑盒操作及保存方法。

樣品收集、處理及保存：

　　1、細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

　　2、細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104

　　-106/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

　　3、血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

　　4、血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上

　　清。

　　5、體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

　　6、組織標本：切取組織標本，稱取重量0、5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000

　　rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。

　　7、樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

　　8、保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　兔ELISA試劑盒操作步驟：

　　1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

　　2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7、溫育：操作同3。

　　8、洗滌：操作同5。

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

　　11、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應在加終止液后15分鐘以內進行。