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對(duì)于懸浮細(xì)胞,該如何裂解?
我初次用Dual-Luciferase Reporter Assay法檢測(cè)Luciferase活性，在制備細(xì)胞裂解液時(shí)，由于我培養(yǎng)的是Raji懸浮細(xì)胞，無(wú)法按照Protocol上所說(shuō)的關(guān)于貼壁細(xì)胞的方法（PBS漂洗后棄漂洗液和殘留培養(yǎng)基，再加入1X PLB，覆蓋單層細(xì)胞），該如何正確操作，以使懸浮細(xì)胞正常裂解以利于檢測(cè)？（特別是：對(duì)1X PLB加入的量、裂解的時(shí)間等有何講究？）謝謝！
對(duì)懸浮細(xì)胞來(lái)講，離心后PBS洗一遍，然后加裂解液。裂解的方法，一個(gè)是渦旋器震蕩2分鐘，在有就是超聲破碎，兩者可以結(jié)合使用
好。我做過(guò)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。其實(shí)驗(yàn)步驟如下：1。收集轉(zhuǎn)然后的細(xì)胞，1000r,5min.2.用無(wú)血清培養(yǎng)基或者PBS洗一遍。1000r,5min；3.加入1×PLB，在室溫放置15分鐘，然后迅速凍融，12000r,5min；4.熒光素酶雙報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)
這是我們實(shí)驗(yàn)室多次實(shí)驗(yàn)后總結(jié)的方法，很好用的！我們實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在都這么做！
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