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單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理
單細(xì)胞分離儀為細(xì)胞鋪板提供了全新解決方案。該設(shè)備采用新的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速，，準(zhǔn)確的細(xì)胞鋪板工作并且分離過程輕柔，不會(huì)影響細(xì)胞的后續(xù)生長(zhǎng)，能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié)，以及單細(xì)胞測(cè)序等。
單細(xì)胞分離用于細(xì)胞鋪板的原理如下：
將細(xì)胞通過一次性的芯片上端加樣孔，注入到芯片腔體中。單細(xì)胞流在微流控通道中流過激光檢測(cè)區(qū)域，機(jī)器能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別，去除掉細(xì)胞碎片，死細(xì)胞以及狀態(tài)較差的細(xì)胞，使得落到孔板中的細(xì)胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠捕獲每一個(gè)活性細(xì)胞，終形成1ul體積的液滴，輕柔地落進(jìn)孔板中。整個(gè)過程對(duì)細(xì)胞的損傷可以忽略不計(jì)，所以分選得到的細(xì)胞絕大多數(shù)的細(xì)胞都能再次分裂生長(zhǎng)。
單細(xì)胞鋪板整個(gè)過程非?？焖?，一般一塊9孔板分選需要1min左右，單個(gè)細(xì)胞一個(gè)孔的比例在85%~90%，一般細(xì)胞復(fù)蘇的比例在40%~65%。傳統(tǒng)的細(xì)胞鋪板一般采用手動(dòng)的有限稀釋法來(lái)進(jìn)行，這種方法在需要的操作簡(jiǎn)單，只需要普通的排槍就能實(shí)現(xiàn)，但是效果卻很不理想。主要體現(xiàn)在：一致性差，有效孔比例低下，耗費(fèi)時(shí)間等。
近年來(lái)，單抗藥物的開發(fā)領(lǐng)域又被推上了一個(gè)新的高度，越來(lái)越多的公司都紛紛投入到這個(gè)熱潮當(dāng)中，隨之而來(lái)的相關(guān)法規(guī)的要求也是越來(lái)越嚴(yán)格。在眾多的要求當(dāng)中，對(duì)藥物來(lái)源的單克隆源性的要求嚴(yán)格，這就要求生產(chǎn)和研發(fā)的企業(yè)在細(xì)胞株開發(fā)階段做到嚴(yán)格的單克隆驗(yàn)證。目前市面上已經(jīng)有幾款孔板掃描設(shè)備能夠得到認(rèn)可，他們的數(shù)據(jù)可以用來(lái)作為單克隆源性的證明。
在這里我們要討論的是在驗(yàn)證前的分離階段，如何快速、準(zhǔn)確、的獲得單細(xì)胞，除了上面提到的有限稀釋法之外，流式細(xì)胞分選儀也可以用來(lái)作為單細(xì)胞鋪板工具之一，當(dāng)然流式除了操作復(fù)雜，需要專人維護(hù)之外，分選得到的細(xì)胞常常復(fù)蘇比例比較低。在流式分選中，細(xì)胞的損傷比較大。
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