產(chǎn)品及特點(diǎn)

藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)（Giardia lamblia）主要寄生人體小腸、膽囊主要在十二指腸，可引起腹痛、腹瀉和吸收不良等癥狀，導(dǎo)致賈第蟲(chóng)病，為人體腸道感染的常見(jiàn)寄生蟲(chóng)之一。藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)分布于世界各地。由于旅游事業(yè)的發(fā)展，在旅游者中發(fā)病率較高，故又稱(chēng)旅游者腹瀉，已引起各國(guó)的重視。藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)感染的患者，以無(wú)癥狀帶蟲(chóng)者居多，潛伏期多在兩周左右，甚至可達(dá)數(shù)月不等，臨床癥狀視病變部位而異，其表面多種多樣，癥狀輕重也有不同，因此快速檢測(cè)具有重要意義。熒光定量PCR是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù)，本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

• 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品DNA模板。
• 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。
• 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
• 特異性高，引物是根據(jù)人藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
• 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)晒舛縋CR反應(yīng)。
• 本產(chǎn)品既可用于定性，也可用于定量。
• 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為12個(gè)月。

自備試劑

樣品DNA。

使用方法

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

• 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
• 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
• 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
• 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
• 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
• 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

• 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
• 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)鞭毛蟲(chóng)DNA提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20次免DNA提取的天凈沙核酸釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為PCR模板，省略了DNA提取步驟。其使用手冊(cè)可從本公司網(wǎng)站。

三、Probe qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

• 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（用第4號(hào)陽(yáng)性對(duì)照稀釋液，濃度為10000拷貝/μL）。下面只描述定量分析的步驟，定性分析只是把6個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)縮減成1個(gè)，其余不變。
• 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加）：

• 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：

五、數(shù)據(jù)處理

• 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
• 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽(yáng)性。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)可視化LAMP檢測(cè)試劑盒