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通蔚試劑解析抗原抗體的敏感性與免疫測定

來源:通蔚試劑(上海)有限公司   2019年08月21日 08:51  

抗原抗體具體反應(yīng)之敏感性

在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學(xué)比色法的敏感度為 mg/ml 水平,酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍,達ng/ml 水平。例如,用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg,其敏感度可達0.1ng /ml。

 

抗原抗體具體反應(yīng)之標記的免疫測定

如上所述,免疫測定是一種很敏感的測定方法,抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度,敏感度可達 5~10μg/ml,但在科研檢驗中,某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平,因此要尋找增加敏感度的方法。

標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記,通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中,標記物分別為放射性核素和酶,后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量,敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。

在標記免疫測定中,一般加入過量的標記試劑以保證與待測物*反應(yīng)。以標記抗體(Ab ※)檢測抗原(Ag)為例,反應(yīng)式如下:

 

Ag+ Ab※→ AgAb※+ Ab※

 

在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag 結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ,如不將兩者分離而測定標記物,測得的結(jié)果將為兩者之和。因此,游離標記物與結(jié)合標記物的分離是標記免疫測定中的重要步驟??刹捎枚喾N手段,固相載體是其中。

如將抗原或抗體包被在固相載體上,然后再與標記的抗原或抗體直接反應(yīng),結(jié)合的標記物被固定在載體上,而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab ※除去,結(jié)合標記物的測定可在固相上進行。

 

抗原抗體具體反應(yīng)之免疫測定在科研中的應(yīng)用

由于各種抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣,在科研檢驗中可用于測定:

1) 體液中的各種蛋白質(zhì),包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。

2) 激素,包括小分子量的甾體激素等。

3)  抗生素和藥物。

4) 病原體抗原,HBsAg、HBeAg 等。

5) 另外,也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體,例如抗-HBs 等。

 

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