肽的疏水性
氨基酸可以根據(jù)其其側鏈的性質歸類如下:
非極性氨基酸(疏水性) 小的:Cys、Pro、Ala、Thr 大的:Val、Ile、Leu、Met、Phe 中性氨基酸 大的:Trp、Tyr、His 極性氨基酸(親水性) 小的:Ser、Gly、Asp、Asn 大的:Glu、Gln、Lys、Arg 可溶性的問題 許多合成的肽粗品,尤其是那些經(jīng)過幾次沉淀和干燥的,在標準的HPLC溶劑中十分難溶!
原因為: 含有大量的疏水性殘基,它們會象油一樣緊密的擁成一簇,以減少與水的接觸并增大 分子之間的疏水性作用。
非特異性的聚集:
含有Cys的肽中形成二硫鍵, 二級結構的形成,特別是較長的分子。 活性側鏈(包括各種類型的氫鍵、鹽橋等)之間的特異性相互作用 肽的溶解 以下幾種操作可以用來溶解肽(二硫鍵是一種共價的相互作用,應該盡量還原): 對于含有芳香或者烴側鏈的氨基酸(Val、Leu、Ile、Met、Phe、Tyr、Ala),加入DMF至50%溶解;或者加入*少量的DMF,然后用緩沖液稀釋即可。
但應當注意有機溶劑對于后續(xù)試驗的影響。 如果含有較多的堿性氨基酸,可以用醋酸的水溶液(1-10%)進行溶解。 如果含有酸性的氨基酸,可以用揮發(fā)性的堿性緩沖液(pH可以達到8)如乙酸乙脂嗎啉或重碳酸鹽等溶解。 如果序列比較長,有可能溶解于鹽溶液。高濃度的離液鹽,如鹽酸胍或脲等可以通過破壞其二級結構而幫助其溶解。 對于中等大小的分子,丙醇可以加速溶解。
少量的TFA可以幫助溶解聚集物 可以加入去垢劑(如SDS)進行處理,但是需要注意的是含有聚醚的去垢劑可能會產(chǎn)生過氧化物從而損害某些肽??蓮纳虾Mㄎ瞪锕居嗁彿沁^氧化去污劑。
多肽的保存:
大多數(shù)多肽可以保存在-20℃,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,能夠在-20℃的條件下保存兩年而沒有問題。在將它們暴露于空氣之前, 冷凍的多肽和容器應當至少在室溫中放置30min以上時間,然后取用。這將避免多肽樣品吸收潮氣。當無法冷凍干燥時,方法是以小的工作樣量存放。
對于含Cys, Met or TrP的多肽,很容易受到空氣中的氧氣和溶解試劑的氧的影響而氧化。因此,避免此類多肽和氧接觸是很重要的。對其溶解時脫氧緩沖溶劑是*的,在封瓶前,慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。
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