液相色譜儀工作原理:高壓泵將貯液罐的流動相經(jīng)進(jìn)樣器送入色譜柱中,然后從檢測器的出口流出,這時整個系統(tǒng)就被流動相充滿。當(dāng)欲分離樣品從進(jìn)樣器進(jìn)入時,流經(jīng)進(jìn)樣器的流動相將其帶入色譜柱中進(jìn)行分離,分離后不同組分依先后順序進(jìn)入檢測器,記錄儀將進(jìn)入檢測器的信號記錄下來,得到液相色譜圖。
液相色譜儀法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上,引用了氣相色譜的理論,在技術(shù)上,流動相改為高壓輸送,色譜柱是以殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬),同時柱后連有高靈敏度的檢測器,可對流出物進(jìn)行連續(xù)檢測。
一般在使用時注意:
1、在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應(yīng)符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。
2、各品種項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外,其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等,均可適當(dāng)改變。
3、一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢,以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗的要求。
4、如所用流動相為含鹽流動相,反相色譜柱使用后,先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇沖洗。
5、不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱。
6、流動相應(yīng)選用色譜試劑、高水或雙蒸水,酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用,過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍。
7、水相流動相需經(jīng)常更換(一般不超過2天),防止長菌變質(zhì)。
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