產(chǎn)品及特點(diǎn) 幼蟲芽孢桿菌（Bacillus larvae）是引起美洲蜂幼蟲腐臭?。ˋmerican
foul brood）的病原。美洲蜂幼蟲腐臭病又名爛子病，是蜜蜂幼蟲和蛹的一種
細(xì)菌性、急性、毀滅性病害。特征為病蜂的蜂蓋子脾下陷、穿孔、封蓋幼蟲死
亡、蛹蟲現(xiàn)象等。美洲蜂幼蟲腐臭病初發(fā)生于英國，以后傳到歐美各國，截
止至 2011 年*均有發(fā)生。美洲蜂幼蟲腐臭病不但危害性大，而且一旦發(fā)
生就很難*。輕者影響蜂群繁殖和采集力，重者造成蜂群的覆滅，因此幼蟲
芽孢桿菌快速檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列
特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增幼蟲芽孢桿菌，跟其他微生物無交
叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分 成 份 編號 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL（紅蓋）
超純水 100935 1 mL（亮黃蓋）
幼蟲芽孢桿菌 PCR 引物混合液 13-25440yw 100 μL（白蓋）
幼蟲芽孢桿菌 PCR 陽性對照
（1×10E8 拷貝/μL）
13-25440pc 50 μL（黃蓋）
天凈沙核酸釋放劑試用裝 61202 20 次（1mL、綠蓋）
使用手冊 13-25440sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其
他試劑。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽
性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL 陽性對照的10000
倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作
為 PC。另外用水作為 NC。
2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)細(xì)菌 DNA 提取試
劑盒兼容。也可以選購本公司的細(xì)菌 DNAout 或柱式細(xì)菌 DNAout。本試
劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次免 DNA 提取的天凈沙核酸釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可
以直接作為 PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40 μL 體系）
3. 對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性
對照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：
成分
N+2 個(gè)
樣品管
PCR 陰性
對照
PCR 陽性
對照
PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
幼蟲芽孢桿菌 PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 各 18 μL - -
樣品制備陰性對照（超純水） - 18 μL -
樣品制備陽性對照（幼蟲芽孢桿
菌陽性對照的 1000 倍稀釋液） - - 18 μL
4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：
過程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
94℃ 15 sec
58℃ 15 sec
72℃ 30 sec
后延伸 72℃ 10 min
三、電泳檢測
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix
在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR
產(chǎn)物長度為 1106bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何
擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR
擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 幼蟲芽孢桿菌可視化 LAMP 擴(kuò)增試劑盒