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單細(xì)胞分離確保了分析結(jié)果的高精度
單細(xì)胞分離是一種從待分離的材料中直接分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作，對(duì)于體積較大的微生物，可以用毛細(xì)管提取微生物個(gè)體；對(duì)較小的細(xì)胞或孢子，可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細(xì)胞；也可將適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含有一個(gè)細(xì)胞的液滴培養(yǎng)。
對(duì)于較大的微生物，可采用毛細(xì)管提取單個(gè)個(gè)體，并在大量的滅菌培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移清洗幾次，除去較小微生物的污染，這項(xiàng)操作可在低倍顯微鏡，如解剖顯微鏡下進(jìn)行。對(duì)于個(gè)體相對(duì)較小的微生物，單細(xì)胞分離采用顯微操作儀，在顯微鏡下進(jìn)行。目前，市場(chǎng)上有售的顯微操作儀種類很多，一般是通過(guò)機(jī)械、空氣或油壓傳動(dòng)裝置來(lái)減小手的動(dòng)作幅度，在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。
在沒(méi)有顯微操作儀時(shí)，也可采用一些變通的方法在顯微鏡下進(jìn)行單細(xì)胞分離，例如，將經(jīng)適當(dāng)稀釋后的樣品制備成小液滴在顯微鏡下觀察，選取只含一個(gè)細(xì)胞的液滴進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。單細(xì)胞分離法對(duì)操作技術(shù)有比較高的要求，限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究中采用。
在目前的研究中，單細(xì)胞分離的手段主要是通過(guò)將細(xì)胞懸浮后做高通量篩選。其中主要使用的是流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)或者免疫磁性細(xì)胞分選法，這兩種方法在臨床上目前均廣泛應(yīng)于細(xì)胞篩選，然而這兩種方法均需要使用相當(dāng)大量數(shù)量的細(xì)胞，一般在105-106數(shù)量級(jí)上。然而很多研究中，培養(yǎng)出的細(xì)胞不太容易達(dá)到這個(gè)數(shù)量級(jí)，而在少量細(xì)胞分選中，這兩種方法均面臨著挑戰(zhàn)。
微流控芯片技術(shù)的出現(xiàn)讓少量單細(xì)胞分離有了新的選擇，該方法主要通過(guò)熒光、磁力、流體動(dòng)力流、聲光電泳、介電泳粘附等性質(zhì)進(jìn)行分離。這種方法往往需要較低的細(xì)胞濃度來(lái)實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞分離，因此在分離過(guò)程中需要嚴(yán)格控制進(jìn)入微流控芯片中的細(xì)胞量。
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