鏈霉素ELISA檢測(cè)試劑盒樣本前處理以及注意事項(xiàng)

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：0.05M  PB緩沖液

    稱取12.9g Na₂HPO₄·12H₂O和2.175g NaH₂PO₄·2H₂O加去離子水1000ml溶解。

配液2：0.04M磷酸（蜂蜜樣品）

    1ml濃磷酸加去離子水定溶至360ml。

配液3：1M NaOH（蜂蜜樣品）

    稱取4g NaOH加去離子水定溶至100ml。

配液4：復(fù)溶液

    將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 組織樣本

1）稱取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣品，加入8ml 0.05M PB緩沖液，振蕩5min，置56℃水浴環(huán)境放置30min；

2）室溫4000r/min以上離心10min；

3）取1ml上清液加入1ml正己烷，充分混勻，室溫4000r/min以上離心5min；

4）去除上層有機(jī)相，取50ul下層液，加入450ul 稀釋后的復(fù)溶液，混合30s；

5）取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)：40     檢測(cè)下限：4ppb

5.3.2 蜂蜜、蜂王漿

1）稱取2±0.05g 樣品，加入4ml 0.04M磷酸，振蕩至*溶解，室溫4000r/min以上離心5min，直至清亮。（蜂蜜樣品可不用離心直接進(jìn)行第2步）；

2）加入450ul 1M NaOH將PH值調(diào)至7-9之間(蜂王漿樣品需將全部上清移至另一干凈離心管中調(diào)節(jié)PH值至7-9之間)，室溫4000r/min以上離心5min ，直至清亮；

3）取50ul上清液，加入450ul稀釋后的復(fù)溶液混勻，混合30s；

4）取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)：20     檢測(cè)下限：2ppb

5.3.3 牛奶、奶粉

1）稱取2±0.05g樣品，加入8ml 0.05M PB緩沖液，振蕩5min，置56℃水浴環(huán)境放置30min；

2）室溫4000r/min以上離心10min；

3）去除上層脂肪，取50ul中層澄清液體，加入450ul 稀釋后的復(fù)溶液，混合30s；

5）取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)：50     檢測(cè)下限：5ppb

6 注意事項(xiàng)

6.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

6.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

6.3 混合要均勻，洗板要*，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

6.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

6.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

6.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。