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單細(xì)胞分選的使用方法及用途
單細(xì)胞分選用流式細(xì)胞儀將特定的細(xì)胞分選出來(lái)的技術(shù)，在分選前，細(xì)胞要被戴上特殊的符號(hào)，所用的符號(hào)細(xì)胞的探針是可以同待分選細(xì)胞外表特征性蛋白（抗原）結(jié)合的抗體，而這種抗體又可以同某種熒光染料結(jié)合。
當(dāng)結(jié)合有熒光染料的探針與細(xì)胞群溫育時(shí)，探針就會(huì)同具有特異外表抗原的細(xì)胞緊緊結(jié)合，因?yàn)榭贵w的結(jié)合，被結(jié)合的細(xì)胞帶上了熒光符號(hào)，細(xì)胞被符號(hào)之后，除掉游離的抗體，并將細(xì)胞進(jìn)行稀釋。當(dāng)稀釋的細(xì)胞進(jìn)入超聲波振蕩器時(shí)，極稀的細(xì)胞懸浮液形成很小的液滴，一個(gè)液滴中只含有一個(gè)細(xì)胞。液滴一旦形成并經(jīng)過(guò)激光束時(shí)，激光束激發(fā)結(jié)合在細(xì)胞外表抗體分子成為一種標(biāo)簽。
當(dāng)液滴逐一經(jīng)過(guò)激光束時(shí)，受到兩種檢測(cè)器的檢測(cè)：如果液滴中含有細(xì)胞就會(huì)激活干涉檢測(cè)器，只有帶有熒光符號(hào)細(xì)胞的液滴才會(huì)激活熒光檢測(cè)器，當(dāng)帶有熒光符號(hào)的液滴經(jīng)過(guò)激光束時(shí)，將兩種檢測(cè)器一起激活，引起液滴充電信號(hào)使鞘液帶上負(fù)電荷。因?yàn)橐旱螏в胸?fù)電荷，移動(dòng)時(shí)就會(huì)向正極移動(dòng)，進(jìn)入到熒光符號(hào)細(xì)胞收集器中。單細(xì)胞分選請(qǐng)用50%的條件培養(yǎng)基，并將血清的比重提高到20%，條件培養(yǎng)基就是用過(guò)的培養(yǎng)基， 里面會(huì)含有細(xì)胞因子和其他分泌物， 這有助細(xì)胞存活。
如果是含有非熒光符號(hào)細(xì)胞的液滴進(jìn)入激光束，只會(huì)被干涉檢測(cè)器檢測(cè)到，成果使充電信號(hào)將液滴的鞘液帶上正電荷，從而在移動(dòng)時(shí)偏向負(fù)極，被非熒光符號(hào)細(xì)胞收集器所收集。如果是不含有單細(xì)胞分選的液滴進(jìn)入激光束，則不會(huì)被任何檢測(cè)器所檢測(cè)，因此不會(huì)產(chǎn)生充電信號(hào)，液滴的鞘液不會(huì)帶上任何電 荷，所以在移動(dòng)時(shí)不受任何影響直接進(jìn)入非檢測(cè)的收集器。
單細(xì)胞分選的原理其實(shí)跟分析相似，也是由鞘液帶去給激光分析，根據(jù)所染的熒光來(lái)得出結(jié)果，而分選的不同就是細(xì)胞在經(jīng)過(guò)激光后也會(huì)經(jīng)過(guò)噴嘴，單個(gè)細(xì)胞會(huì)以單液滴的分式流出，再按分析結(jié)果由高壓電板賦予相應(yīng)的電荷，將其分選到不同的收集管中。單細(xì)胞分選有不同大小的噴嘴，噴嘴越小分選的速度就越快。所以挑選噴嘴要視乎細(xì)胞的大小，一般來(lái)說(shuō)噴嘴需要比細(xì)胞大4-6倍。如果選的噴嘴太小，會(huì)令細(xì)胞容易受壓 失去活性，也會(huì)影響分選的穩(wěn)定性。
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