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HIV-2 前病毒 PCR 試劑盒

來源:上海雅吉生物科技有限公司   2019年09月24日 10:26  

產(chǎn)品及特點 牛細小病毒(Bovine Parvovirus,BPV) 會引發(fā)牛細小病毒感染,是一種接觸性傳染病,以下痢為主要癥狀,其特征是母牛生殖機能障礙,導(dǎo)致妊娠母牛感染導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎,犢牛感染則表現(xiàn)腸炎、腹瀉。牛細小病毒感染在牛群中發(fā)生比較廣泛,目前國內(nèi)外對其研究的較少,發(fā)生此病的國家也不多,本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測牛細小病毒的試劑盒,它具有下列特點:

1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據(jù)牛細小病毒高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。

6.本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝

2×Probe qPCR MagicMix 190303 0.5 mL(本色蓋)

熒光PCR模板稀釋液 180701 1 mL(黃蓋)

牛細小病毒 PCR引物 15-44000yw 100 μL(白蓋)

牛細小病毒 qPCR探針 15-44000pro 100 μL(棕色管)

牛細小病毒陽性對照2.0

(1×10E8拷貝/μL) 15-44000pc 50 μL(紅蓋)

天凈沙核酸釋釋劑試用裝 61202 50次(2.5mL)

使用手冊 15-44000sc 1份

 

運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。

自備試劑 樣品DNA。

使用方法 一、稀釋標準曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。

2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。

3.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

7.如果有N個樣品,設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。

8.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒DNAout。本試劑盒免費贈送50次免DNA提取的天凈沙核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為PCR模板,省略了DNA提取步驟。

三、Probe qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進行)

9.如果只做1次重復(fù),則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標準曲線樣品。

10.在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):

成分 樣品管

N+2個 PCR陰性對照管 標準曲線

樣品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各10 μL

牛細小病毒 qPCR探針 2 μL 2 μL 各2 μL

牛細小病毒 PCR引物混合液 2 μL 2 μL 各2 μL

 待測樣品DNA模板 6 μL 不加 不加

第7步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7號) 不加 不加 各6μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管…)

11.蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行PCR:

過程 溫度 時間

預(yù)變性 94℃ 5 min

PCR反應(yīng)

(40個循環(huán)) 94℃ 0.5 min

55℃ 0.5 min(采集FAM通道的熒光信號)

72℃ 0.5 min

后延伸 72℃ 10min

12.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 牛細小病毒可視化LAMP檢測試劑盒

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