有限稀釋法對于篩選雜交瘤來說,是zui普通的方法,在許多實驗室中都在使用。但是,作為相對舊的技術(shù),已經(jīng)不能滿足當(dāng)今的需求。方法自身具有許多缺點:
1、人工操作,操作及重復(fù)的步驟太多,不可避免容易出錯。
2、速度慢,效率低。只能保證30-40%的孔有細(xì)胞生長。對于高通量篩選來說,不能滿足要求。
3、不能保證單克隆,需要亞克隆3-4次,所以,人工和耗時都較多。
4、有限稀釋在ELISA檢測前,并不知道哪一個克隆滿足抗原特異性的要求。所以,需要對所有克隆,都要zui少做一次ELISA鑒定。
除了有限稀釋方法,現(xiàn)在相對先進(jìn)的細(xì)胞分選技術(shù)也得到普遍應(yīng)用。一般就是細(xì)胞分選儀或者流失細(xì)胞技術(shù)對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選。其原理是先將細(xì)胞分散開,沒有細(xì)胞結(jié)團。通過在細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記熒光信號。當(dāng)單個細(xì)胞在壓力作用下單個通過玻璃毛細(xì)管的時候,儀器可以自動檢測單個細(xì)胞的熒光信號強度。熒光信號強度反應(yīng)這個細(xì)胞的相應(yīng)抗體表達(dá)水平。zui后,將高熒光信號強度的細(xì)胞收集,再通過有限稀釋得到高水平表達(dá)的單克??;或者也可以使用單細(xì)胞收集器收集高水平表達(dá)的單個雜交瘤細(xì)胞。
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