今天，將為您帶來梯度方法開發(fā)攻略②：梯度條件的影響因素，共同探討在梯度條件下需要注意哪些因素。

1. 不同色譜柱的分離選擇性

2. 梯度斜率

3. 初始有機相比例

4. 梯度拐點設(shè)置

5. 流動相或柱溫優(yōu)化

 不同色譜柱的分離選擇性

不同色譜柱的疏水性、表面極性存在差異，因此化合物的出峰時間也會受到影響，我們可以根據(jù)化合物的特性選擇合適的色譜柱。

 梯度斜率

梯度斜率  N =Δ B% / tGra （% / min）

梯度斜率越大，洗脫速度越快，但分離度同時下降。

 初始有機相比例

初始比例  Binitial %，通常對于早出峰的化合物保留分離影響大。

 梯度拐點設(shè)置

合理設(shè)置梯度拐點，可以有效地縮短分析時間。

  流動相或柱溫優(yōu)化

溫度從35℃升高到45℃，增強了化合物的分離度。

調(diào)整流動相比例，可以有效縮短分離時間。

通過更換色譜柱柱長、粒徑、流速、來獲得快速分析結(jié)果。

梯度分析中需要注意的幾個問題

1）梯度條件需要進(jìn)行充分洗脫；

2）梯度進(jìn)行完畢需要重新平衡回初始狀態(tài)，才能進(jìn)行下一個梯度序列的分析；

3）梯度條件會造成基線漂移，需要進(jìn)空白樣確定梯度基線變化；

4）注意觀察壓力變化情況；

5）當(dāng)流動相中含有緩沖鹽時，在梯度有機相高點不得鹽析。