新喋呤 ELISA 簡明操作說明
(德國IBL原裝)RE:59321
新喋呤生物合成與細(xì)胞免疫系統(tǒng)的活性關(guān)系密切,據(jù)報道在病毒感染病人新喋呤升高,認(rèn)為升高源于直接防御病毒感染細(xì)胞的免疫應(yīng)答。已證實抗原刺激人外周血單核細(xì)胞可引起新喋呤釋放入細(xì)胞培養(yǎng)液中,人巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)時受γ-干擾素刺激產(chǎn)生新喋呤。人體液中新喋呤水平的測定為細(xì)胞介導(dǎo)免疫的相關(guān)疾病監(jiān)測提供了一種有用和創(chuàng)新的工具。許多傳染病,新喋呤水平升高先于臨床表現(xiàn)和血清變化。通常樣本不會進(jìn)行所有可能的傳染病測定,因此為了降低輸血傳染的危險性,對獻(xiàn)血員樣本進(jìn)行新喋呤測定是有意義的。
測定新喋呤的其它診斷應(yīng)用有:
l 重復(fù)損傷的ICU病人
l 用于預(yù)測HIV感染和惡性疾病
l 移植手術(shù)后病人并發(fā)癥的早期預(yù)測
l 自身免疫性疾病、疾病活動的指征
l 病毒感染的診斷
l 急性病毒和細(xì)菌感染的鑒別診斷
l 慢性感染復(fù)發(fā)和免疫刺激治療的監(jiān)測
實驗原理
本試驗應(yīng)用競爭ELISA原理
一. 試劑準(zhǔn)備(以32個樣本測試配制)
1. 洗滌緩沖液:加15ml濃縮液至干凈的容器中加雙蒸水至300ml(1:20稀釋)2—8℃貯存。
2. 酶聯(lián)結(jié)物:25ul濃縮液加入5ml實驗緩沖液(1:201稀釋),2—8℃zui多貯存24小時。
3. TMB底物液:用9ml TMB底物緩沖液稀釋300ul濃縮液。(1:31稀釋)2—8℃可保存48小時。
二. 樣本收集及貯存
1. 樣本、血清,EDTA 抗凝血漿
2. 貯存 2--8℃24小時
-20℃ 長期貯存,避光保存避免反復(fù)凍溶。
三. 實驗步驟
整個實驗過程應(yīng)避免陽光直射,將試劑盒平衡至室溫。
1. 加10 ul標(biāo)準(zhǔn)品、樣本或質(zhì)控于相應(yīng)反應(yīng)孔中。
2. 加50ul新喋呤抗血清于各孔中。
3. 加100ul酶聯(lián)物。
4. 用封板紙封板后,室溫(20-25℃)振蕩(500轉(zhuǎn)/分),90分鐘。
5. 棄去孔中液體,洗板3次。
6. 加200ul TMB底物液于各孔中。
7. 室溫(20-25℃)避光放置10分鐘。
8. 以加TMB 底物液的順序加100ul終止液于各孔中。
9. 混勻后15分鐘內(nèi)450 nm讀吸光度。
注意:洗滌過程對實驗結(jié)果是重要的。
從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可以直接查到樣本的結(jié)果。樣本OD值高于zui大的標(biāo)準(zhǔn)品。應(yīng)將樣本用實驗緩沖液稀釋后檢測,結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
四. 期望值
血清正常值 小于10nmol/L(2.5ng/ml)
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準(zhǔn)。
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