單細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見又必須掌握的一門技術(shù)，看似簡單，我們卻經(jīng)常遇到：如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象，導(dǎo)致我們只能扔掉，重新鋪板。既耽擱時(shí)間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。歷經(jīng)多次失敗后，才發(fā)現(xiàn)原來單細(xì)胞鋪板是有規(guī)律可循的，今天我們就聊一聊：細(xì)胞鋪板的技巧。

　　首先，了解一下單細(xì)胞鋪板的必要性!

　　從經(jīng)濟(jì)和的角度來說，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對(duì)待測細(xì)胞半抑制率(IC50)測試時(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度;另外還可一次性測多個(gè)藥物，減少實(shí)驗(yàn)誤差。

　　下面我們?cè)賮砹私庖幌?strong>單細(xì)胞鋪板可能會(huì)出現(xiàn)的問題

　　1、細(xì)胞計(jì)數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差?

　　考慮細(xì)胞沉降導(dǎo)致懸液不勻;懸液體積過大或過小;稀釋倍數(shù)太高或太低等原因造成。

　　2、如何克服細(xì)胞懸液不均勻的問題?

　　盡量將細(xì)胞吹打?yàn)閱蝹€(gè)，防止抱團(tuán)，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。

　　3、一般加多少細(xì)胞懸液合適?

　　由于加入計(jì)數(shù)室的量，過少會(huì)導(dǎo)致計(jì)數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡，過多則會(huì)使得計(jì)數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計(jì)數(shù)板，使得高度變高，體積變大;計(jì)數(shù)室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。

　　4、計(jì)數(shù)時(shí)，細(xì)胞稀釋倍數(shù)如何控制?

　　若是計(jì)數(shù)室細(xì)胞過稀或過密，會(huì)造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細(xì)胞/ml。如一般10cm皿的細(xì)胞約300-500萬個(gè)，一些細(xì)胞個(gè)體小也能達(dá)到1000-2000萬，可根據(jù)所需細(xì)胞數(shù)目取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計(jì)數(shù)。舉例來說可將100ul細(xì)胞懸液加入到900ul培養(yǎng)基中，混勻后進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)所得乘以10即為實(shí)際細(xì)胞密度。

　　5、計(jì)數(shù)的原則有哪些?

　　計(jì)數(shù)時(shí)對(duì)壓在外圈邊線的細(xì)胞遵循“計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右”的統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，遇到兩個(gè)以上的細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)計(jì)為一個(gè)細(xì)胞。