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淺析人ELISA試劑盒實(shí)驗操作步驟
ELISA操作前，應(yīng)做好實(shí)驗的設(shè)計、選擇適合自己技術(shù)范圍和靈敏度的人ELISA試劑盒 、提前訂購和準(zhǔn)備試劑及耗材、處理樣本等準(zhǔn)備工作。
在收集標(biāo)本前需有一個完整的計劃，需要清楚要技術(shù)的成份是否足夠穩(wěn)定。ELISA技術(shù)提倡新鮮標(biāo)本盡早技術(shù)，對收集后當(dāng)天就進(jìn)行技術(shù)的標(biāo)本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請取材后，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。
二、ELISA標(biāo)準(zhǔn)品溶解
標(biāo)準(zhǔn)品是人ELISA試劑盒的技術(shù)抗原的一個度量標(biāo)尺，因此標(biāo)準(zhǔn)品的溶解、倍比稀釋和保存要特別注意以下細(xì)節(jié)：凍干標(biāo)準(zhǔn)品溶解按照說明書的要求，準(zhǔn)確復(fù)溶。在冰上操作標(biāo)準(zhǔn)品為佳，靜止5－10分鐘，輕輕搖勻后按照一次量分裝，在-20度或-70度保存。標(biāo)準(zhǔn)品嚴(yán)禁反復(fù)凍融。標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋應(yīng)事先做好準(zhǔn)備，如離心管的準(zhǔn)備和編號以及稀釋液的準(zhǔn)備；稀釋時，應(yīng)充分混勻；采用進(jìn)口或者硅化的EP管，減少蛋白吸附。在實(shí)驗孔內(nèi)進(jìn)行倍比稀釋時，注意操作規(guī)范，槍頭勿刮劃預(yù)包被的孔底。
三、ELISA操作中的洗滌
洗滌是ELISA實(shí)驗中是多次數(shù)的操作，也是非常重要的步驟。不嚴(yán)格的洗滌容易出現(xiàn)洗不干凈或交叉污染現(xiàn)象，實(shí)驗重復(fù)效果差的現(xiàn)象。不管用多道加樣器、洗瓶、吸管，還是洗板機(jī)，嚴(yán)格按照說明書操作不要減少步驟洗滌的洗滌體積、洗滌時間和洗滌次數(shù)。注意標(biāo)準(zhǔn)化操作將減少實(shí)驗誤差和不同實(shí)驗之間的誤差。操作者常出現(xiàn)洗板不干凈現(xiàn)象，請比照“手工洗板小貼士”操作：
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相鄰的孔，特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度的孔污染了低濃度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定會增高。
b)特別注意：設(shè)計實(shí)驗的時候要考慮實(shí)驗孔的位置，保證甩掉洗液時，空白孔、低濃度孔或陰性對照組在上面或一側(cè)或分開。同時注意甩掉洗液的動作翻轉(zhuǎn)（從正上方旋轉(zhuǎn)120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右搖擺、旋轉(zhuǎn)來甩液體！甩出后以直線方式補(bǔ)2－3次甩出液體。
c)用干凈的濾紙，不要用衛(wèi)生紙，因為細(xì)小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導(dǎo)致洗板不干凈，結(jié)果偏高或偏低，重復(fù)孔的數(shù)值也會相差很大。
d)每次拍板不要重復(fù)在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟；拍板不宜過輕，否則拍不干凈，拍板很用力不會對蛋白有什么影響。但注意不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，后一次一定要扣干凈。
e)不能減少洗液體積、洗板時間和次數(shù)。洗板時間太短，洗板效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。
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